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1 부 : 운영 필드의 작성
- 운영 필드 75% 이소 프로필 알코올로 소독합니다.
- 가열 패드와 적당한 온도에 있는지 확인하십시오. 권장 시스템 ° C ± 1 ° C. 37 유지 치료 패드에 연결된 Gaymar 순환 펌프입니다 심장 박동의 급속한 감소를 피하기 위해 그것은 수술 동안 정상 체온을 유지하는 것이 중요합니다.
- 수술 도구는 수술 전에 뜨거운 구슬 살균기로 소독을하고 있습니다. 무딘 가위, 물론 곡선 집게 X 2, 벌금 45 ° 직각 집게 X 2, 직각 봄 가위, 가슴 견인기, 그리고 바늘 홀더 :.이 절차 들어, 다음과 같은 수술 도구가 필요합니다
- 커튼 applicators은 출혈의 경우를 대비해해야합니다.
2 부 : 준비 및 마우스의 삽관법
- 마우스로 유도 챔버에 anesthetized 아르 2퍼센트 isoflurane 0.5 -1.0 L / 분 백퍼센트 O 2 혼합.
- 헤어 가위는 neckline 중순 가슴 수준으로 모피를 면도하는 데 사용됩니다.
- 마우스는 체온을 유지하기 위해 가열 패드 위에 부정사 위치에 배치됩니다.
- 고무 밴드는 목에을 연장하기 위해 동물의 앞니 위에 배치됩니다. 한 손으로 곡선 집게를 사용하여 혀가 부드럽게 측면으로 조작할 수 있습니다. 다른 한편으로, endotracheal 삽관법은 PE 90 튜브를 사용하여 수행됩니다. endotracheal 튜브 그런 다음 숨을 125-150 / 분에서 하버드 볼륨 순환될 쥐 환풍기 사이클링 0.1 - 0.3ml의 갯벌 볼륨에 연결되어 있습니다. 1.0 L / 분 백퍼센트 O 2 - 수술 도중 마취가 0.5와 isoflurane 1.5-2 %에서 관리하고 있습니다. 마취의 올바른 수준 마우스 손톱 침대 (발가락 - 핀치 반사)에 압력을 적용하여 확인됩니다.
- 외과 분야는 70 % 알콜 다음 betadine 솔루션으로 소독합니다. 이 절차는 세 번 반복됩니다.
- 작업하는 동안 수술 부위의 오염을 방지하기 위해 무균 드레이프는 작업 필드 노출 떠나는 마우스 배치됩니다.
- 멸균 장갑 세트 각 마우스에 사용됩니다.
파트 3 : 트랜스 대동맥의 결합
- 두 번째 늑골을 부분 thoracotomy은 수술 현미경을 수행하고 흉골은 가슴 견인기를 사용하여 철회 있습니다.
- 좋은 팁 45 ° 직각 포셉가 부드럽게 대동맥 아치에서 thymus과 지방 조직을 분리하는 데 사용됩니다.
- 가로 대동맥의 신분에 따라, 6.0 실크 봉합사의 작은 조각은 innominate과 왼쪽 경동맥 동맥 (그림 1) 사이에 배치됩니다.
- 두 느슨한 노트는 가로 대동맥 주위에 연결되어 있으며, 27의 작은 조각은 ½ 게이지 뭉툭한 주사 바늘을 가로 대동맥에 평행하게 배치됩니다. 첫 번째 매듭은 빠르게, 바늘에 대해 연결된 두 번째로 다음과 바늘 즉시 직경 0.4mm의 수축을 항복하기 위해 제거됩니다. 가짜 제어 마우스에서 전체 과정은 대동맥의 결합을 제외하고 동일합니다.
- 가슴 견인기을 제거하고 다시 부풀려 폐 2 초 동안 환풍기 모근에서의 유출이다.
- 갈빗대는 중지 봉합 패턴 6.0 prolene의 봉합사를 사용하여 닫힙니다.
- 피부는 지속적인 치료 패턴 6.0 prolene의 봉합사를 사용하여 닫힙니다.
4 부 : 포스트 수술 복구
- 이후 수술 진통제 들어, 마우스가 buprenorphine (0.1 밀리그램 / kg) intraperitoneally로 주입됩니다. 수술 후 탈수의 징후가있다면, 멸균 생리가 intraperitoneally 주어집니다.
- 마취는 점차 해제 위치로 낮춘 및 자발적인 호흡의 징후가 발생할 때 endotracheal 튜브가 제거됩니다.
- 마우스가 발생하기 쉬운 위치로 이동하고 손난로에서 복구하는 허용됩니다.
5 부 : 트랜스 대동맥의 성공적인 결합의 확인
- TAC 후 일주일은 마우스가 가로 대동맥의 결합에 의해 유도된 압력 과부하에 노출된 정도를 확인하기 위해 다시 anesthetized입니다. 37 유지 1.0 L / 분 백퍼센트 O 2, 체온 ° C ± 1 ° C. - 위에서 설명한 바와 같이, 마취는 0.5과 isoflurane 1.5-2 %로 유지
- 20 MHz의 도플러 프로브 흐름 판매율을 탐지하기 위해 45 ° 각도로 목의 왼쪽과 오른쪽 측면에 배치됩니다. 컴퓨터 기반의 도플러 신호 프로세서 (인더스 인 스트 루먼트, 휴스턴, TX) 도플러 신호를 표시하고 저장하는 데 사용되었다. 5
- 실험 프로토콜에 필요한 압력 과부하의 정도에 따라 오른쪽 경동맥 (RC) / 좌측 경동맥 (LC) 특정 범위 내에서 유동 비율만을 생쥐는 추가 분석을 위해 포함됩니다. 심각한 압력 과부하의 결과 어깨를 수축이 T를 리드 반면에 예를 들어, 압력 과부하의 중간 정도, 5-8의 비율로 연결80-10의 OA 비율 (그림 5.3A). 가짜 동물은 (운영하지만, 출혈도 잡았하지 않음) 그러나, ~ 1 (그림 5.3B)의 비율을 것으로 예상된다.
6 : 대표 결과
야생 형 생쥐의 전술에 따라 일반 외과 생존은 80-90 % 정도입니다. 가로 대동맥의 성공적인 수술 내고 5-10의 오른쪽과 왼쪽 경동맥 사이의 도플러 유속 비율 (RC / LC) (그림 1)으로 이어질 것입니다. 가짜 운항 마우스 (그림 2A)에 비해 압력 과부하와 생쥐는 수축 (그림 2B)의 죄어져 있음에 따라, 6-8 주에 1~2주 및 심장 팽창 이내에 심장 비대를 개발 예정이다. 유전자 - 수정된 생쥐가 다른 생존 속도를 전시 수도 있지만 TAC 후 첫 달 동안 사망률은 야생 형 생쥐에 (<20 %) 일반적으로 낮습니다. 6,7
그림 1. 도플러 속도 측정을 사용하여 트랜스 대동맥의 결합의 확인. 오른쪽 대표 도플러 속도 신호 (RC)과 왼쪽 경동맥 (LC) 동맥 육일 포스트 TAC. 이 음반은 ~ 6.8의 RC / LC 유동 비율과 함께 성공적인 결합을 보여줍니다. 하시기 바랍니다 여기를 클릭 그림 1의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.
그림 2. TAC 다음 대표 전심 이미지. . 섐 - 운영 야생 타입 마우스 심장. B. 와일드 타입 마우스 심장 16주 포스트 TAC. 각 라인 = 1mm.
