마우스 Oocytes의 검색

요약

이 프로토콜은 생쥐의 수란관에서 추출 oocytes 또는 초기 단계 수정된 배아에 대한 기법을 보여줍니다. infindibulum를 식별하고 그것에 뭉툭한 끝을 바늘을 삽입하는 기능은 제대로 절차를 수행하는 것이 필수적입니다.

초록

지금까지 단 몇 연구 Peromyscus embryogenesis 또는 생식 생물학의 성공적인 조작을보고있다. 함께 Peromyscus 유전 증권 센터 (http://stkctr.biol.sc.edu)로, 우리는이 시스템을 개발하는 데 필요한 돌출 차이를 특성화하고 있습니다. 기본 목표는 oocyte / 초기 배아 검색을 최적화되었습니다.

프로토콜

배아 / Oocyte 검색

1. 이전 배아 / oocytes의 검색에 적어도 두 시간은, KSOM가 37 º C CO ₂ 배양기와 FHM에 배치됩니다는 -20 °에서 해동의해야합니다. 세 오목한 얕은 우물을 포함하는 유리 그릇은 인큐베이터에 KSOM의 집 방울하는 데 사용됩니다. 탈수 방지하기 위해, KSOM와 접시는 바닥에 물이있는 lidded 컨테이너에 배치됩니다. 이 장치는 광유를 사용하지 않고 증발을 방지합니다.
   
   
2. 앤 여성에서 oviducts는 FHM 미디어에 배치됩니다. 오리 엔테이션 및 손상 infindibulum을 보장하기 위해, 난소의 작은 섹션은 자궁의 수란관 작은 섹션과 함께 절단됩니다. 뭉툭한 30 게이지 바늘이 infindibulum에 무딘 바늘을 삽입하여 수란관에서 배아 / oocytes을 추방하는 데 사용됩니다. 수란관 튜브 통과하기 위해 바늘에 비해 너무 작습니다 때문에 infindibulum는 배아를 검색하는 데 사용해야합니다. infindibulum이 파괴되는 경우, 수란관이 중 오픈 슬라이스 또는 배아 압박이 있어야합니다.
   
   
3. 배아 / oocytes는 페트리 접시의 바닥으로 가라앉아있는 기름 방울에 현미경을 집중하여 FHM 미디어에서 찾을 수 있습니다.....

토론

이 문서에서는, 우리는 배란 유도 (superovulated) Peromyscus에서 oocytes의 검색을 보여줍니다. superovulation의 사용은 (천연 estrous 사이클 반대) 때문에 훨씬 더 결과 숫자로 일반적입니다. 그러나,주의는 배란과 culturing를 유도하는 데 사용되는 호르몬이 모두 영향을 수 있으므로, 이러한 oocytes / 배아를 이용 결과를 해석에 촬영해야합니다.

estrous이 확정되면, 암컷은 euthenized와 oviducts는 난소의 일부와 함께 회복되었습니다. 난소의 작은 지역은 infindibulum의 위치를​​ 표지로 사용됩니다. infindibulum은 종종 시간은 조직의 얇은 계층을 통해 돌출, 난소 옆에 앉아있다. 이 조직의 다른 측면에서 수란관의 나머지 코일되고 결국 질로 연결됩니다. oocytes를 추출 infindibulum를 통해 유체를 밀어하는 것이 좋습니다. 이 방향으로 인해 질 - 수란관 인터페이스에있는 편도 밸브가 필요합니다. 그들은 밸브를 통해 거꾸로 예상하는 경우 oocytes.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
플러싱 니들	도구	Zephyrtronics	ZT5-130-L	30 G blunt
포셉 (2)	도구	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5060
Peromyscus	동물	Peromyscus Genetic Stock Center
가위	도구	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5880
FHM HEPES 완충 배지	시약	Specialty Media	MR-025-d
KSOM 배아 배양 배지 (5x 10 mL)	시약	Specialty Media	MR-020P-5F
마우스 피펫	도구			유리 모세관을 가늘게 늘려 고무 튜브에 연결함
난자 홀딩 디쉬	도구			오목한 홈이 있는 유리 용기