신속하고 편리한 브래드 포드 분석에 의해 단백질 결정의 정확성과 감도는 본질적인 비선 형성에 의해 손상됩니다. 우리는 크게, 정확성을 증가 10 배에 대한 분석의 감도를 향상하고, 크게 세제에 의해 간섭을 줄일 수있는 간단한 선형화 절차를 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
브래드 쿠매시 화려한 파란색 분석에서 단백질의 마이크로 그램 수량의 결정은 590 nm의 흡광도에서 측정하여 수행됩니다. 이것은 가장 일반적인 분석은 생화 학적 측정의 정상화를 목적으로, 세포 lysates, 휴대 분수, 또는 재조합 단백질 샘플에 신속하고 간단하게 단백질 부량 수 있습니다. 그러나, 본질적 비선 형성이 방법의 감도와 정확성을 타협. 이것은 표준 분석 조건 하에서 흡광도 590 NM에서 측정과 450 nm의 비율은 단백질 농도와 엄격하게 선형임을 표시됩니다. 이 간단한 절차는 정확성을 증가 및 아래쪽 소 혈청 알부민 50 NG 10 배, 좋으 부량에 대한 분석의 감도를 향상시킵니다. 또한, 일반적으로 세포 lysates을 만드는 데 사용되는 세제의 도입 간섭은 크게 새로운 프로토콜에 의해 줄어 듭니다. 대량 작업 및 맥주의 율법에 기초하여 개발된 선형 방정식 완벽하게 실험 데이터를 맞는 데요.
프로토콜
브래드 포드 단백질 보정 그래프의 선형화 :
일반적으로 브래드 포드 분석 1로 알려진 쿠매시 화려한 파란색 단백질 분석은, 널리 때문에 신속하고 편리한 프로토콜뿐만 아니라 그 상대 감도의하는 데 사용됩니다. 불행히도, 단백질 농도의 광범위한 (그림 1) 이상의 곡률의 큰 정도가 있습니다. 따라서, 상대적으로 높은 단백질 농도, 20-10 MG / ML BSA의 단지 좁은 범위는 다음 더 나은 (그림 1, 녹색) 선형 회귀에 맞는 보정 그래프에 대한 사용됩니다. 그러나, 비선 형성은 큰 오류를 방지하기 위해 교정 그래프의 제한된 범위 내에서 가을에 알려지지 않은 샘플의 단백질 농도를 필요로하고 또한 제한된 범위의 정확성을 줄일 수 있습니다. 비선 형성은 단백질의 마이크로 그램 금액은 사용할 수 없습니다 특히 심각한 문제를 제시하고, 그것은 종종 알려지지 않은 샘플의 여러 dilutions이 필요합니다.
마찬가지로 원래 브래드 포드 종이에 명시된 바와 같이, "염료의 두 가지 색상 형태의 스펙트럼에 중복이되기 때문에 비선 형성의 원인은 시약 자체입니다."1. 사실, 쿠매시 화려한 파란색 색소의 세 형태 분석 2 일반적인 산성 산도에서 산....
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토론
브래드 포드 단백질 분석 인해 성능과 상대 감도 자사의 용이성으로 인기가 있습니다. 프로토콜에 의해 얻은 범위 전체 단백질 농도 이상의 선형화는 미지 샘플의 교정 그래프의 범위 내에서 빠지지하지 않아도 여기에 추가로, 분석을 간단하게 제시.
중요한 것은 향상된 프로토콜은 더 이상 원래 브래드 프로토콜에 비해 다음과 같은 장점을 제공합니다 :
- 정확도를 증가했다.
- 감도는 그것이 가능한 microplate 분석 6으로 작은 50로 NG의 BSA를 결정하고, 크기 약 1 명령에 의해 증가됩니다.
- 향상된 감도는 세제의 면전에서 단백질 양을 정함 수 있습니다. 원래 브래드 포드 프로토콜로, 일반적으로 세포 용해에 사용되는 세제에 의한 간섭은 종종 단백질을 감소 반응의 결과 것입니다. 진도 중 하나의 명령에 의해 감도의 개선 세제에 의해 간섭이 제거되는 지점으로 샘플의 희석을 수 있습니다. 표준 샘플은 희석 알.......
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감사의 글
본 논문은 여기에서 설명한 원래 연구를 호스팅하는 후반 박사 Zvi 셀린저의 기억에 전념하고 있습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Bradford 시약 | Bio-Rad | 500-0006 | |
| 소 혈청 알부민(Bovine Serum Albumin) | Amersco | 0332 | |
| 멀티플레이트 흡광도 측정기 | BioTek | Synergy2 |
참고문헌
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).
- Chial, H. J., Thompson, H. B., Splittgerber, A. G.
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재인쇄 및 허가
