자기 변조 Biosensing 시스템을 사용하여 생물 학적 Assays의 급속한 동차 검색

요약

자기 변조 biosensing 시스템은 빠르게, sensitively 단순히 같은 DNA 분자와 단백질과 같은 생물 학적 assays를 감지하는 활용됩니다.

초록

자기 변조 biosensing 시스템 (MMB) [1,2] 빠르게하고 세척 또는 분리 단계없이 낮은 농도에서 homogeneously 감지 생물 학적 대상으로하고 있습니다. IL - 8 목표는 현재의 때, 'sandwich' 기반 분석은 IL - 8 대상과 biotinylated IL - 8 항체 결합을 통해 형광 단백질을 streptavidin하는 IL - 8 캡처 항체와 자기 구슬을 첨부. 자석 구슬은 두 개의 전자 기둥을 통해 교류 자기장 기울기를 적용하여 oscillatory 모션으로 였는데 있습니다. 자석 구슬에 연결된 형광 단백질은 직교 레이저 빔을 동기 검출을 사용 복조된하는 정기 형광 신호를 생산에서 퇴원 감지 영역과 운동으로 응축됩니다. 자기 변조 biosensing 시스템은 이전에 비 구조 이바라키 바이러스 단백질 3 (NS3) 보완 DNA (cDNA) [2]의 코드 시퀀스를 검색하는 데 사용되었다. 입자의 외부 조작 및 응축이 작품 시연되는 기술은 다른 응용 프로그램, 자기 (磁 气) - 결합 약물의 예를 들어 전달에 사용할 수 있습니다

프로토콜

IL - 8 검정 :

1. 각각의 농도의 분석 완충액 100 μl 최종 볼륨의 반응 혼합물은 다음 네 가지 구성 요소가 포함되어 있습니다. 100 구슬 / μl 최종 농도 1 nano-gram/μl 최종 농도에 biotinylated IL - 8 항체 2 μl, 20 nano-gram/μl 최종 농도에 streptavidin 형광 단백질의 1 μl에서 캡처 항체와 자석 구슬 10 μl 0.48 pico-gram/μl에서 IL - 8 대상의 1 μl. 구성 요소 분석 버퍼를 하나씩 추가하고 30 분 흔들리고 있습니다.
2. 제어 반응은 IL - 8 대상없이 동일한 방식으로 준비가되어 있습니다.
3. 반응은 나중에 cuvettes에서 분리 또는 세척 단계없이 배치와 MMB 시스템을 사용하여 검사하고 있습니다.

MMB 시스템 :

1. 두 전자기 채를 사이의 위치에 쿠베트를 놓습니다.
2. 변조 전류를 운영하고 구슬의 집합과 결로 수 있도록 30 초 기다
3. 잠금 기능 증폭기 오실로 스코프를 사용하는 신호를 측정합니다.

대표 결과 :

집계 비즈의 ....

토론

요약, 우리는 MMB 시스템이 낮은 농도 (0.5 피코 - g가 [3,4] 바이오 플렉스 정밀 프로 시토킨 assays의 검출 한계입니다)에서 IL - 8 대상의 존재를 감지하는 데 사용할 수있는 것으로 나타났다. 시스템의 기능은 IL - 8에 국한되지 않으며 다른 단백질을 탐지하는 데 사용할 수 있습니다. MMB 시스템의 장점은 빠른 속도로 및 분리 또는 세척 단계없이 목표물을 감지하는 능력입니다. 따라서, 그것은 검색 프로세스를 용이하게하고 시스템을 현장 애플 리케이션에서 사용할 수 있습니다.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Bio-Plex Pro Human Cytokine IL-8 세트	Bio-Rad	171-B5008M
재조합 인간 IL-8 타겟	Thermo Fisher Scientific, Inc.	R202625
Biotin 결합 단클론 마우스 항 인간 IL-8 항체 G265-8	BD Biosciences	554718
Streptavidin 결합 형광 단백질	Bio-Rad	Streptavidin PE