선충의 동결 균열: 염색을 위해 내부 벌레 조직을 노출시키는 방법

초록

출처: Zhang, N., et al. C. elegans intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging. J. Vis. 특급 (2017).

이 동영상은 큐티클을 파괴하여 예쁜꼬마선충 조직이 항체 염색에 접근할 수 있도록 하는 방법인 동결 균열에 대해 설명합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Zhang et al, The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging, J. Vis. Exp. (2017)에서 발췌한 것입니다.

C. elegans 장의 항체 염색

1. 고정
   1. 깨끗한 유리 슬라이드를 가지고 폴리-L-라이신을 사용하여 벌레가 붙을 수 있는 박막을 생성합니다. 슬라이드에 30μL 0.1-0.2% 폴리-L-라이신을 놓고 폴리-L-라이신 드롭에 두 번째 슬라이드를 놓아 "샌드위치"를 만듭니다. 그런 다음 슬라이드를 몇 번 부드럽게 문질러 양쪽 표면 전체를 적시고 30분 동안 자연 건조시킵니다. 슬라이드의 젖빛 면에 연필로 레이블을 지정합니다.
      

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항체 염색
폴리 -L- 라이신	시그마	P5899
메탄올	피셔 사이언티픽	대답452-4
아세톤	피셔 사이언티픽	A949SK-4
퍼마운트	피셔 사이언티픽	재질 보기 SP15-100
현미경 슬라이드	피셔 사이언티픽	4448
현미경 커버슬립(22x22-1)	피셔 사이언티픽	12-542-B
M9 미디엄			실험실에서 만든
OP50 박테리아	CGC (영어)

조