선충 슬라이드 준비: 한천 패드에 동물을 장착하는 방법

초록

출처: Teoh, J. S., et al. Caenorhabditis elegans의 세포 구조 및 세포 기관 형태를 연구하기 위한 정량적 접근 방식. J. Vis. 특급 (2019).

예쁜꼬마선충의 실시간 이미징 중에 아가로스 패드를 사용하여 선충을 손상시키거나 건조시키지 않고 가만히 유지할 수 있습니다. 이 비디오는 현미경 검사를 위한 간단한 장착 패드를 준비하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Teoh et al, Quantitative Approaches for Studying Cellular Structures and Organelle Morphology in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019)에서 발췌했습니다.

이미징을 위한 슬라이드 준비

1. 전자레인지용 병(초순수 3mL에 3-4g)에 아가로스 스톡이 있는 3-4%를 준비합니다.
   참고: 한천은 동일한 농도의 아가로스 대신 사용할 수 있습니다.
2. 아가로스가 모두 녹을 때까지(맑은 용액) 너무 끓지 않도록 주의하면서 전자레인지에 아가로스를 조심스럽게 녹입니다. 응고를 방지하기 위해 용액을 70°C로 유지하십시오.
   참고: 아가로스 스톡은 여러 번 사용할 수 있습니다. 아가로스가 굳은 경우 사용하기 전에 다시 가열하십시오.
3. 파스퇴르 피펫을 사용하여 녹은 아가로스 한 방울을 현미경 슬라이드에 떨어뜨립니다.
   참고: 한천 방울에 기포가 있으면 패드의 무결성을 방해하므로 피하십시오.
4. 즉시 다른 현미경 슬라이드로 아가로스 방울을 눌러 아가로스를 두 슬라이드 사이의 패드로 부드럽게 평평하게 만듭니다.
   참고: 남은 거품은 이 단계에서 제거해야 합니다. 그렇지 않은 경우 동물이 거품에 쉽게 갇힐 수 있으므로 새 슬라이드를 만들어야 합니다. 슬라이드를 누를 때 한천이 옆으로 넘치지 않도록 하십시오.
5. 아가로스를 1분 동안 말리십시오.
6. 아가로스가 손상되지 않도록 두 슬라이드를 조심스럽게 분리하고 슬라이드 중 하나에 응고된 패드를 그대로 둡니다.
   참고: 아가로스 패드가 있는 슬라이드는 건조될 수 있으므로 실험 직전에 항상 신선하게 준비해야 합니다. 아가로스 패드의 두께가 일정한지 확인하십시오. 이미징을 방해할 수 있으므로 패드에 기포나 균열이 없어야 합니다.
7. 0.05% 테트라미솔 염산염(마취제)을 아가로스 패드 중앙에 소량(5-10μL) 떨어뜨립니다.
8. 열 멸균 픽을 사용하여 용액이 마르기 전에 약 10 – 15 마리의 동물을 스톡 플레이트에서 마취 방울로 빠르게 옮깁니다. OP50 박테리아를 너무 많이 옮기면 용액이 흐려져 이미징을 방해할 수 있으므로 피하십시오.
   참고: 피킹하는 동안 마취액이 마르면 0.05% 테트라미솔 염산염을 동물에게 두 번째 피펫으로 떨어뜨리기만 하면 됩니다. 동물은 마취액에서 옆으로 눕는 경향이 있습니다.
9. 커버슬립을 아가로스 패드 바로 위에 놓고 부드럽게 떨어뜨려 커버슬립을 적용합니다. 이렇게 하면 기포가 형성되는 것을 방지할 수 있습니다. 동물을 짓밟을 수 있으므로 커버슬립에 압력을 가하지 마십시오.
10. 슬라이드에 변형주 이름을 지정합니다.

재료

<표 테두리="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:729px;" width="730"> 이 논문에 사용된 재료 목록 이름 회사 카탈로그 번호 댓글 한천 머크 1.01614.1000 아가로스 인비트로젠 16500-500년 유리 커버슬립 #1 열 과학 MENCS22221GP 유리 커버슬립 #1.5 자이스 474030-9000-000 SCHOTT 제작 유리 슬라이드 열 과학 MENS41104A/40 파스퇴르 피펫 코 닝 CLS7095D5X-200개 플래티넘 와이어 시그마 267201-2지 테트라 미솔 염산염 시그마 L9756-5G