성충 파리에서 중장 해부: 소화관을 분리하는 방법

초록

출처: Tauc, H. M., et al. 노화 중 줄기세포 거동을 연구하기 위해 FACS로 성인 초파리 중장에서 장 줄기세포 분리. J. Vis. 특급 (2014).

이 비디오에서는 장 줄기 세포를 분리하기 위해 성인 초파리 장의 해부와 단세포 해리 및 FACS에 적합한 중장 수집을 강조합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Tauc et al., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014)에서 발췌한 것입니다.

참고: 이 프로토콜이 FAC 정렬로 ISC를 격리하는 데 처음 사용되는 경우 FACS 매개변수를 초기에 올바르게 설정하기 위해 다음 제어가 필수입니다. 야생형에서 해리된 세포(예: w¹¹¹⁸) Sytox가 없는 초파리 중창자. 야생형(예: w¹¹¹⁸) Sytox를 사용한 초파리 중장에서 해리된 세포(3.6단계 참조). Sytox가 없는 esg-Gal4, UAS-GFP 플라이 라인의 중장에서 해리된 세포.

1. 장 해부를 위한 용액 및 요리 준비

1. esg-Gal4, UAS-GFP 플라이 라인에서 40마리의 암컷 파리를 각각....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
겸자: Dumont, Inox Biologie #5	정밀 과학 도구	11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 μm 나일론 메쉬)	세파르	3A03-0150-102-00
Falcon 5ml 원형 바닥 폴리스티렌 시험관(셀 스트레이너 스냅 캡 포함	코 닝	352235
폴리맥스 1040	하이돌프	전화: 543-42210-00
소 혈청에서 추출한 알부민(BSA)	시그마	A4503-50G
0.5% 트립신-EDTA	인비트로젠	제15400-054	다른 회사에서 얻은 트립신은 활성 이 다를 가능성이 높으므로 트립신 분해 기간도 그에 따라 조정해야 합니다.
SYTOX Blue Dead Cell 염색 유세포 분석을 위한	생명 기술	S34857
RNAlater 안정화 솔루션	생명 기술	AM7023	다른 용액, 예를 들어, Trizol은 후속 RNA 분리를 위해 사용될 수 있습니다.
FACSAria II 세포 분류기	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)		정렬 1시간 전에 전원을 켭니다.

년 ) 호