C. 예쁜꼬마선충 생존 분석: 단기 독성 테스트

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 동영상은 급성 독성 치료법을 테스트하거나 독성 상태에 대한 내성을 위해 유전적 균주를 테스트하는 단기 생존 분석을 소개합니다. 예제 프로토콜은 파라콰트(PQ)에 의해 유발된 산화 스트레스에 저항하는 기생충의 능력을 테스트하는 생존 분석의 예를 보여줍니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 산화 스트레스 저항 분석 수행

100mM PQ 용액 40μl를 96웰 플레이트의 모든 웰에 피펫으로 분사합니다. 최소 12개의 웰을 모든 상태(치료, 돌연변이 등)의 복제물로 사용합니다. 백금 와이어 웜 픽을 사용하여 시작 시간과 종료 시간을 나타내는 5-8 개의 L4 유충 동물을 모든 우물로 옮깁니다.
다른 조건을 시작할 때는 시작 시간과 종료 시간을 기록해 둡니다. 접시를 20°C에 놓고 벌레를 옮기고 시작 시간으로부터 한 시간 후에 죽은 동물에 점수를 매기는 사이의 부화 시간에 접시를 놓습니다.
해부 현미경을 사용하여 매 시간마다 생존율을 세십시오. 계수를 시작하기 전에 플레이트를 부드럽게 흔듭니다. 고휘도의 빛을 발견한 후에도 움직이지 않는 벌레를 죽은 동물로 표시합니다. 또한 살아있는 동물의 수를 표시하십시오.
참고: 지렁이의 모양, 꼬리, 머리의 움직임을 고배율로 보면 살아 있는 지렁이가 죽었는지 확인하는 데 도움이 됩니다.
대부분의 지렁이가 죽을 때까지 매시간 이 단계를 반복합니다.

2. 모든 시점에서의 생존율 결정

모든 우물로 이송된 총 동물 수를 더하여 조건당 총 동물 수를 계산합니다. 이송 시 손상되거나 죽임을 당한 동물은 무시합니다.
모든 시점에 대해 조건당 죽은 동물의 총 수(12개의 우물에서 죽은 동물의 합)를 계산합니다. 모든 시점에 대해 사망률(죽은 동물의 수를 총 동물 수로 나눈 후 100을 곱한 값)과 생존율(100에서 사망률을 뺀 값)을 계산합니다.
이 분석을 최소 3회 이상 독립적으로 반복합니다.

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이 논문에 사용된 재료 목록

이름

회사

카탈로그 번호

Discovery v8 zeiss 스테레오 현미경

자이스

96웰 투명 마이크로타이터 플레이트

재인쇄 및 허가

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