출처: Tong, J, et al. Caenorhabditis elegans의 운동에 대한 주문형 정량 분석을 위한 미세유체 기반 전기택시.J. Vis. 특급(2013).
연구원들은 벌레가 감지하고 반응하는 전기장을 적용하여 예쁜꼬마선충에서 주문형 움직임을 유발할 수 있습니다. 이 비디오는 전기 전술 거동을 소개하고 미세 유체 장치에서 수행되는 샘플 프로토콜을 보여줍니다.
이 논문에서
초록
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프로토콜
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이 프로토콜은 Tong et al, Caenorhabditis elegans' Locomotion의 주문형 정량 분석을 위한 Microfluidic-based Electrotaxis, J. Vis. Exp. (2013).
1. 전기택시 실험
- 모니터에 카메라가 연결된 장착된 현미경의 스테이지(가급적이면 XY 이동 가능)에 마이크로 채널을 배치합니다(그림 1).
- 전원 공급 장치 또는 연결 ampliifier의 출력 와이어를 마이크로 채널의 전극에 연결합니다. DC 신호만 필요한 경우 간단한 DC 전원 공급 장치로 충분하지만 함수 발생기에 연결된 증폭기를 사용하면 펄스 DC 및 AC 신호도 적용할 수 있습니다.
- 마이크로 채널의 출력 튜브를 일회용 주사기에 부착합니다. 주입 튜브의 입구를 M9 생리적 완충액에 담그고 주사기 내부에 음압을 가하여(수동 또는 주사기 펌프 사용) 액체를 채널로 부드럽게 흡인합니다. 주입구 튜브와 배출구 튜브가 모두 M9로 채워지면 튜브에서 주사기를 분리합니다. 정수압으로 구동되는 흐름을 방지하기 위해 두 튜브를 같은 높이로 수평을 맞추십시오.
- 채널에 DC 전압을 적용하고 저항(R= V/I)이 약 0.6MΩ(길이 50mm, 너비 0.3mm, 깊이 ~0.1mm 마이크로 채널의 경우)인지 확인합니다.
- 채널의 무결성이 만족스러우면 위의 단계에 따라 희석된 현탁액에서 채널로 웜을 로드합니다.
- 주사기를 분리하고 튜브의 상대 높이를 조정하여 흐름을 정수정역학적으로 조작합니다. 이 방법을 사용하여 채널 중앙에 웜을 배치한 다음 두 튜브를 동일한 높이에 평평하게 놓습니다.
- 전원 공급 장치를 적절한 볼륨으로 설정하십시오.tage: L3 단계 동물의 경우 4-12V/cm, L4의 경우 10-4V/cm, 청년의 경우 2-4V/cm. 전기 신호를 활성화하고 웜이 자기장에 적응할 때까지 1분 동안 사전 노출을 허용합니다. 웜이 음극을 향해 움직이기 시작해야 합니다. 시간이 지나면 카메라를 사용하여 녹화를 시작합니다.
- AC 및 펄스 DC 실험의 경우, 위로부터 최대 응답 전기장을 채택할 수 있으며 신호의 주파수 및 듀티 사이클을 원하는 대로 변조할 수 있습니다.
- 실험이 완료되면 채널에서 모든 액체(및 웜)를 제거하고 dH20으로 헹구고 장치를 125°C의 열판에 올려 건조시킵니다.
- NIH ImageJ(http://rsbweb.nih.gov/ij/) 또는 사용자 지정 MATLAB 기반 웜 추적 소프트웨어를 사용하여 녹화된 비디오에서 운동 데이터를 수동으로 추출합니다.
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결과
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그림 1. 선충 전기택시 분석을 위한 미세유체 스크리닝 플랫폼의 개략도.
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