Larval Locomotion Assay: 제브라피시 유충에서 화합물의 신경행동 독성을 연구하기 위한 고처리량 방법

초록

출처: Zhang B., et al. 제브라피시 유충에 대한 환경 오염 물질의 신경 행동 효과 연구. J. Vis. 특급 (2020년)

이 기사는 유충의 이동을 모니터링하여 독성 화합물에 대한 제브라피쉬의 행동 반응을 설명합니다. 이 프로토콜은 환경 오염 물질에 대한 제브라피시 유충의 반응 예를 더 자세히 살펴봅니다.

프로토콜

1. 행동 테스트 준비

1. 800μL의 노출 용액을 48웰 마이크로플레이트의 모든 웰로 옮깁니다.
   메모: 모든 그룹(즉, 대조 용액, 5μg/L 및 50μg/L 그룹)에 대해 16개의 웰을 사용합니다.
2. 1mL 피펫 팁을 사용하여 유리 페트리 접시에서 유충 1개와 함께 200μL의 노출 용액을 48웰 마이크로플레이트의 1웰로 옮깁니다.
3. 4mL의 노출 용액을 6웰 마이크로플레이트의 모든 웰에 전달합니다.
   메모: 모든 그룹에 대해 하나의 6웰 마이크로플레이트를 사용하십시오.
4. 1mL 피펫 팁을 사용하여 2개의 유충이 있는 200μL의 노출 용액을 6웰 마이크로플레이트의 각 웰로 옮깁니다.
   메모: 각 그룹에는 6개의 반복 그룹이 있습니다.
5. 테스트 룸의 온도가 테스트 2시간 전에 28°C인지 확인하십시오.
   메모: 행동 테스트는 보통 오후에 실시합니다.

2. 운동 및 경로 각도 테스트

1. 프로토콜을 저장하고 시험실의 조명을 끕니다.
2. 시스템에서 유충을 10분 동안 적응시키고 "실험" "실행" 버튼을 차례로 클릭한 다음 실험 파일이 저장된 폴더를 선택하고 결과 이름을 입력합니다.
3. "배경" "시작" 버튼을 차례로 클릭하여 테스트를 시작합니다.
4. 테스트가 종료되면 "실험" "중지" 버튼을 차례로 클릭하여 실험을 중지합니다.
   메모: 시스템이 중지될 때 테스트된 데이터가 표시됩니다. 데이터에는 3개의 속도 등급에서 추적된 거리와 매분의 8개 각도 등급에서 경로 각도 번호가 포함됩니다. 제시된 예제의 운동 테스트의 경우, 모든 광 주기(10분)의 총 거리를 계산하고 대조군과 치료 그룹 간의 차이를 비교합니다.
5. 다른 실험을 위해 48웰 마이크로플레이트를 광 인큐베이터로 다시 옮깁니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
48웰 마이크로플레이트	코 닝	3548	Embyros 하우징
6-웰 마이크로플레이트	코 닝	3471	Embyros 하우징
얼룩말 상자	관점	얼룩말 상자	행동 도구
지브라랩	관점	지브라랩	행동 소프트웨어
피펫	에펜도르프	3120000267	전송 솔루션