성체 제브라피시 장 해부: 화합물 흡수를 분석하는 기술

초록

출처: Jie J. et. al., 성인 제브라피쉬의 구강 삽관: 생체 활성 화합물의 장 흡수를 평가하기 위한 모델. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 생체 활성 화합물의 장 흡수를 평가하기 위해 장을 분리하는 기술을 설명합니다. 이 샘플에서는 면역 자극제의 흡수를 분석하기 위해 성체 제브라피시의 장을 분리할 것입니다.

프로토콜

1. 제브라피시 장 해부

1. 삽관 후 지정된 시간(예: 5시간 및/또는 24시간) 후 안락사를 위해 그물을 사용하여 물고기를 300mg/L 에틸 3-아미노벤조에이트 메탄설포네이트(MS-222) 용액에 넣습니다. 수술이 움직임을 멈추고 꼬리 꼬집음 반사가 없는지 확인하십시오. 일반적으로 5분이면 충분합니다.
2. 그물로 안락사된 동물을 집어 여과지 위에 올려 놓습니다.
   메모: 여과지는 장을 따라 접착 조직을 제거하는 데 매우 유용합니다.
3. 날카로운 절개 가위를 사용하여 항문에서 수술부까지 반원형으로 절개하고 가는 핀셋으로 절개를 엽니다. 장의 양쪽 끝을 자르고 내장을 모두 꺼내 여과지에 올려 놓습니다.
   주의: 세포 대사와 사멸을 줄이기 위해 신속하게 작업하십시오.
   메모: 또는 PBS와 얼음 위의 접착 조직을 제거합니다.
4. 장을 내부 장기에서 분리하여 방향(앞쪽에서 뒤쪽 장부분)을 유지하고 늘립니다. 일반적으로 장의 앞쪽 부분은 뒤쪽 부분보다 넓습니다. 해부할 때 장의 모든 부분을 확보하도록 주의하십시오.
   메모: 뒤쪽 끝은 작은 물고기에서 매우 미세하고 깨지기 쉬우 며 특히 동물에서 부러질 수 있습니다 <0.7g.
5. 핀셋으로 여과지에 장을 굴려 장에서 접착 조직을 분리합니다.
6. 다양한 다운스트림 분석을 위해 장 준비를 진행합니다
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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
MS-222	시그마 알드리치	E10521	가루
PBS 10배	시그마 알드리치	P5493
여과지	필터 랩	RM14034252

(영문)