PDX 종양 세포 표지를 위한 형질도입: In vitro에서 종양 세포에 형광 마커를 발현하는 렌티바이러스 도입

초록

출처: Hanna, C., et al. 종양 성장 및 전이 연구를 위한 추적 가능한 리포터를 사용한 유방암 환자 유래 이종이식편의 라벨링. J. Vis. 특급 (2016).

다음 비디오는 녹색 형광 단백질을 발현하는 렌티바이러스와 루시페라제 리포터를 in vitro에 종양 세포에 도입하는 데 사용되는 PDX 종양 세포 라벨링(환자 유래 이종 이식편)으로의 형질도입 기술을 설명합니다.

프로토콜

1. PDX 유래 종양 세포의 형질도입

1. 원심분리기는 300g x 5분에서 종양 세포를 해리하고 2ml 유방권 배지에 재현탁합니다. 트리판 블루 배제를 사용하여 생존 가능한 세포를 계수합니다(5ml 세척 완충액에 소화된 세포를 재현탁하고 트리판 블루 배제를 사용하여 생존 가능한 세포와 생존 불가능한 세포를 모두 계수합니다. 간단히 말해서, 50 μl의 세포와 50 μl의 트리판 블루를 혼합하고 혈구계를 사용하여 세포를 제외한 트리판-블루를 계수합니다.
2. 8μg/ml 폴리브레렌(배지 ml당 2μl의 스톡 폴리브레네)을 포함하는 10ml의 유방권 배지를 준비합니다.
3. 2 x 10⁵ 생존 가능한 종양 세포에 필요한 부피를 결정합니다. 300 x g에서 5분 동안 세포를 원심분리하고 펠릿을 폴리브레렌 함유 배지 2ml에 재현탁합니다. 플레이트 2 x 10 6-well ultra-low adherence tissue culture plate.
   메모: 이는 하나의 렌티바이러스 벡터를 사용한 transduction에 필요한 최적의 세포 수입니다.
   주의!렌티바이러스 입자 및 렌티바이러스 입자와 함께 사용되는 모든 소모품은 재조합 D....

결과

그림 1: 해리된 PDX 세포의 형질도입 효율 추적. A) pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro 렌티바이러스 입자로 형질도입 24시간 후 인간 상피세포(Lin+ 고갈)를 위해 농축된 PDX 해리 세포. B) 상피 세포 농축 없이 pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W로 형질주입 후 72시간 후에 실시한 별도의 실험에서 PDX가 해리된 세포. 두 패널 모두 살아있는 셀을 표시합니다. BF: 명시야 이미지, 막대는 50μm를 나타냅니다

.....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM/F12 (1:1)	하이클론	SH30023.01
bFGF	BD 바이오사이언스	제354060
증권 시세	BD 바이오사이언스	354001
덤플링을	시그마	H4784
나27	Gibco/써모 피셔	17504-44
항진균제 항생제	하이클론	SV30010
HBSS 레드 Ca2+/Mg2+ 무함유	하이클론	SH30031.02
헤페스
컬트렉스	컬트렉스	Tel.: 3433-005-01	지하 매트릭스 추출물(BME)
30 °C 셰이커	뉴브런즈윅 사이언티픽 CO. INC	시리즈 25 인큐베이터 셰이커

호 표시기 년