BC 세포 공동 배양: 암세포 증식을 연구하기 위해 뼈 조각과 함께 유방암 세포 배양

초록

출처: Templeton, Z. S., et al. 전이성 틈새의 유방암 세포 집락화를 연구하기 위한 인간 대퇴골 조직 외식 배양 방법. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 인간 뼈 조직 이식 모델 시스템에서 암세포 증식 및 집락화를 측정하기 위해 대퇴골 이식에 인접한 유방암 세포를 배양하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

1. BLI를 사용하여 유방세포 증식을 측정하기 위해 뼈 조각에 인접한 유방암 세포를 공동 배양

1. 실험에 앞서, 2 x 10⁵ 유방암 세포/50 μl를 포함하는 현탁액을 준비하고, 배양에서 뼈 조각을 고정시키기 위한 뼈 왁스 플러그를 준비합니다. P200 마이크로피펫 팁을 3조각으로 자르고 가장 큰 조각의 좁은 끝을 "쿠키 커터" 방식으로 사용하여 작은(~35mg) 뼈 귀지 조각을 자릅니다. 가장 작은 조각의 넓은 끝을 사용하여 뼈 귀지 플러그를 페트리 접시에 넣어 보관하십시오.
2. 각 웰의 12시 위치에 뼛조각을 놓고 멸균 장갑을 낀 검지로 부드럽게 누릅니다.
3. 6-well plate의 각 well 중앙에 DMEM-10% FBS + Pen-Strep의 1 x 10⁵ 유방암 세포를 포함하는 50 μl의 세포 현탁액을 피펫으로 만듭니다. (또는 원하는 경우 분산된 패턴의 종자 세포를 사용할 수 있습니다.) 세포 부착을 촉진하기 위해 37°C 조직 배양 인큐베이터에 플레이트를 45분 동안 놓습니다.
4. 각 실험용 웰의 뼈 왁스 1개에 뼈 조각 1개를 놓고 롱거로 부드러운 압력을 가하여 고정합니다. 주어진 THR 표본의 뼈 조각 3개를 상단 3개의 웰에 배치하고 하단 3개의 웰에는 대조군으로만 뼈 왁스를 포함하도록 3회 실험을 수행합니다.
5. 5ml 피펫을 사용하여 5ml의 DMEM-10% FBS를 각 웰 측면에 부드럽게 천천히 전달하여 유방 세포나 뼈 조각이 빠지지 않도록 합니다. 플레이트를 37°C 조직 배양 인큐베이터에 20-24시간 동안 놓습니다.
6. 생물 발광 이미징(BLI)을 수행하려면 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 각 웰에 루시페린 기질(300μg/ml의 농도 달성을 위해)을 추가합니다. 다음 매개변수를 사용하여 IVIS 이미징 플랫폼에서 즉시 플레이트를 이미지화합니다: f-stop 1, 작은 비닝, 노출 시간 1초, 레벨 D. 각 웰의 신호 강도를 평균 광도(광자/초/제곱센티미터/스테라디안)로 측정합니다.
7. 이미징 소프트웨어를 사용하여 관심 영역(ROI)을 정의하고 모든 실험 및 제어 웰에 대한 평균 광도를 정량화합니다. 평균 광도 값을 Excel 시트로 내보내 통계를 수행하고 그래프를 생성합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM (1X) + 글루타MAX-l	생명 기술	10569-010	모든 DMEM에 10% 소 태아 혈청과 1% Pen/Strep
소 태아 세럼	생명 기술	제16000-044
페니실렌 스트렙토마이신	생명 기술	15140-122
D-루시페린 반딧불이, 칼륨 염 5g (30mg/ml)	생명 기술	L-8220
6웰 TC 처리된 세포 배양 클러스터	코닝 주식회사	3516
프리드먼-피어슨 롱거	정밀 과학 도구	16021-14
뼈 왁스	외과 전문 공사	903
IVIS 50 이미징 플랫폼	캘리퍼 생명 과학/PerkinElmer
MCF-7 유방암 세포	증권 시세	HTB-22
MDA-MB-231 유방암 세포	증권 시세	증권 시세 표시기 HTB-26

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