Intraductal Injection: 마우스 유선의 관으로 주입 혼합물을 전달하기

초록

출처: Xiang, D., et al. 마우스 유선에 CRE 발현 아데노바이러스의 관내 주사를 통한 유방암 모델링. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 마우스 유선의 관으로 주입 혼합물을 전달하는 관내 주사 기술에 대해 설명합니다.

프로토콜

1. 관내 주사

1. 수술 과정 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용하십시오.
2. 두 개의 4번째 서혜부 MG 사이에 ~1cm 길이의 피부 절개 부위를 만듭니다(그림 1). 유선관나무를 시각화하기 위해 두정복막에서 피부 피판(MG 포함)을 조심스럽게 분리합니다.
3. Watchmaker의 집게로 젖꼭지를 조심스럽게 잡고 미세 해부 가위를 사용하여 근처의 피부를 자르지 않고 외부 젖꼭지를 제거합니다.
4. 33G 금속 허브 바늘이 부착된 25μL Hamilton 주사기에 ~3–5μL의 Ad-Cre 주입 혼합물을 로드합니다. 혼합물에 포함된 파란색 염료를 기준으로 주사기 내 주입 혼합물의 부피를 추정합니다.
   메모: 3-4주 된 암컷의 MG에 주입할 때는 더 작은 부피(예: 3μL)를 사용하고 수유 중인 암컷의 MG에 주입할 때는 더 큰 부피(예: 10μL)를 사용하십시오.
5. 가늘게 구부러진 핀셋으로 피부 피판의 가장자리를 부드럽게 잡고 Ad-Cre 주입 혼합물을 유두에 천천히 주입하는 동시에 유관 나무로 파란색 염료가 퍼지는 것을 모니터링합니다. 관 루멘의 손상을 방지하기 위해 주입 속도를 가능한 한 낮게 유지하십시오.
   메모: 주입된 유체(포함된 브로모페놀 블루 염료로 설명됨)가 기질 구획으로 누출되지 않고 전체 유관 나무에 퍼진다는 것은 성공적인 유관 내 주입을 나타냅니다.
6. 주입된 액체가 누출되지 않도록 젖꼭지에서 바늘을 부드럽게 빼냅니다.
7. MG의 원위부(즉, 유두에서 멀어짐) 또는 주입된 유두의 주변 부위를 검사합니다. 부풀어 오르는 파란색 염료(즉, 염료가 주변 기질로 확산됨)는 성공적인 관내 주사라기보다는 유방 지방 패드 주사를 나타냅니다.
8. 상처 클립으로 피부의 수술 상처 (1.2부터)를 닫습니다.

2. 수술 후 관리

1. 마취에서 마우스를 제거하고 회복을 위해 깨끗한 케이지 내부의 가열 패드에 놓습니다.
2. 수술 후 24시간 후에 다시 5mg/kg의 속도로 멜록시캠을 피하투여합니다.
3. 동물의 일반적인 상태를 모니터링하고 5일 동안 절개 부위에서 감염 징후를 찾습니다.
4. 상처 클립은 수술 후 ~7-10일 후에 제거됩니다.

결과

그림 1: Ad-Cre 바이러스를 MG에 주입하는 덕트 내 주입의 개략도.(A) 두 개의 네 번째 MG 사이의 정중선 절개 부위. (B) 네 번째 MG 중 하나에 파란색 염료(더 나은 시각화를 위해)를 사용하여 Ad-Cre를 관내 주입. (C) 상처 클립으로 피부 절개 부위 봉합

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
33 게이지 바늘	해밀턴	7803-05	포인트 스타일 3 무딘
7mm 리플렉스 클립	브레인트리 사이언티픽	RF7 CS
아데노바이러스, Ad-K5-CRE	아이오와 대학교 바이러스 벡터 코어	AD5-BK5-CRE(VVC-베른스-1547)
아데노바이러스, Ad-K8-CRE	아이오와 대학교 바이러스 벡터 코어	Ad5mK8-nlsCre
브로모페놀 블루	시그마-알드리치	B0126-25G
해밀턴 시린지	해밀턴	7636-01	0.025 밀리리터
미세 해부 가위	펜테어	9분	워치메이커의 집게
미세 해부 핀셋	뒤몽	M5

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