India Ink Inflation: 종양 결절을 시각화하기 위한 염색 방법

초록

출처: Paschall, A. V. et al. 자연 유방암 전이의 정소성 마우스 모델. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 종양이 있는 쥐 폐의 종양 결절을 정량화하기 위한 염색 방법인 인도 잉크 인플레이션에 대해 설명합니다. 염색 후 폐를 Fekete의 용액에 고정하여 폐의 종양 결절을 관찰합니다.

프로토콜

1. 종양이 있는 폐의 인도 잉크 팽창을 사용한 폐 전이 검증

참고: 루시퍼라제 라이브 종양 이미징 결과를 검증하려면 종양이 있는 마우스 폐의 인도 잉크 인플레이션을 수행하여 종양 결절을 정량화합니다. 4T1 세포는 다른 장기 및 조직으로도 전이되므로(그림 1) 필요한 경우 종양 전이를 검증하기 위해 이러한 장기에 대한 조직학적 검사를 수행해야 합니다. 이 프로토콜은 폐 전이를 예로 사용합니다.

1. 안락사를 위해 쥐를 기존 집 우리에 보관하십시오. 다른 동물과 함께 사육될 때 안락사되지 않는 쥐를 다른 우리로 재배치하십시오.
2. 케이지 필터 상단을 제거하고 CO2 필터 상단으로 교체합니다. CO2 필터 상단에 연결된 압축 CO2 가스 실린더(100%)를 켭니다. 유속을 2L/min으로 설정하고 최소 10분 동안 CO2를 켜진 상태로 유지하십시오. 10분이 지나도 생쥐가 여전히 숨을 쉬고 있으면 생쥐가 호흡을 멈춘 후 최소 1분까지 CO2를 켜둔 상태로 두십시오. CO2 실린더 제어 장치와 유량계를 끕니다. 3분 더 기다렸다가 필터 상단을 제거합니다.
3. 희생된 쥐를 폴리스티렌 보드 위에 등을 대고 놓습니다. 기관에 방해받지 않고 접근할 수 있도록 다리를 고정합니다. 쥐에 70% 에탄올을 뿌립니다.
4. 가위를 사용하여 쥐의 복부 중간의 정중선을 따라 흉곽을 통해 타액선 쪽으로 자릅니다. 기관을 관찰하십시오. 집게를 사용하여 기관 주변 조직을 제거하여 기관을 노출시킵니다.
5. 기관 아래에 피펫 팁을 끼웁니다. 한 손으로 팁을 잡고 기관을 부드럽게 들어 올려 몸에서 분리합니다.
6. 마우스를 잡고 플랫폼을 180° 회전합니다. 1/2 CC 27 G 1/2 투베르쿨린 주사기를 사용하여 기관을 통해 폐에 India Ink(10% 인도 잉크 및 0.1% 수산화암모늄)를 주입합니다. 강한 저항이 느껴질 때까지 폐를 잉크로 완전히 팽창시킵니다.
7. 가위를 사용하여 기관을 자릅니다. 집게를 사용하여 마우스를 잡고 폐 아래에 다른 집게를 삽입하고 마우스에서 폐엽을 당겨 빼냅니다. 물이 담긴 비커로 폐를 잠시 헹굽니다.
8. 화학 흄 후드에서 Fekete 용액 3ml(50% 에탄올, 6% 포름알데히드, 3% 빙초산)가 들어 있는 유리 섬광 바이알로 폐를 옮깁니다. 용액이 증발하지 않도록 바이알의 뚜껑을 닫습니다.
   메모: 조직은 Fekete의 솔루션에 무기한 저장할 수 있습니다.
9. 몇 분 후 검은색 폐에 종양 결절이 흰색 점으로 나타나는 것을 관찰합니다(그림 1). 백색 종양 결절은 눈으로 볼 수 있습니다. 폐를 흄 후드에 있는 접시로 옮기고 흰 반점의 수를 세십시오. 각 흰색 반점은 단일 전이성 종양 결절을 나타냅니다.

결과

그림 1. India Ink Inflation에 의한 폐 종양 결절의 시각화. 종양을 가진 쥐의 폐를 인디아 잉크로 부풀리고 Fekete의 용액에 고정시켰다. 흰색 점은 폐 전이입니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
9mm AutoClip 애플라이어	Becton Dickinson 일차 진료 진단. 스파크스, 메릴랜드	제427630
뾰족한 해부 가위	어부	8940
세밀하게 뾰족한 겸자 해부	어부	8875
70% 에탄올	Ultrapure-usa.com
1/2 CC 27 G 1/2 투베르쿨린 주사기	Becton Dickinson and Co. 뉴저지	제305620

호 년 년 호