기관지 내 전달: 실험 제제를 쥐의 폐에 선택적으로 투여하는 기술

초록

출처: Liao, S. et. al. 마우스 폐 내 선택적 제제 침착을 개선하기 위해 기관지 내 투여를 지시합니다. J. Vis. Exp. (2019).

이 비디오는 실험제를 원위 우측 및 좌측 폐에 선택적으로 투여하는 기관지 내 접근법을 설명합니다. 주요 프로토콜에서는 폐 섬유증에 대한 더 나은 모델을 얻기 위해 블레오마이신을 마우스에 기관지 내로 투여할 것입니다.

프로토콜

동물과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 비수술적 IB 삽관 및 전달 접근법

1. 원위 우폐의 선택적 엽 캐뉼레이션에 대한 IB 접근법
   1. 기관내(IT) 삽관을 수행한 후(주로 사용하는 손을 사용하여 확장된 카테터를 구강을 통해 기관으로 삽관) 플라스틱 보드를 +30° 회전합니다(그림 1A).
   2. 카테터의 허브를 잡고 마우스 정중선과 평행하게 자연스럽게 안내하여 표 1.
      에 설명된 대로 체중 기반 깊이로 확장합니다. 메모: 이 깊이에서의 저항에 주목해야 합니다. 이 시점에서 마우스는 대표적인 결과에서 설명한 것처럼 약간 빈호흡 상태가 됩니다. 숙련된 시술자의 경우, 약 90%의 시도가 오른쪽 폐를 성공적으로 캐뉼링할 수 있습니다(빈호흡이 나타남).
   3. 겔 로딩 팁으로 20μL의 0.3% Evans blue dye(EBD, 재료 표 참조)를 제공합니다.
   4. 유리 스포이드를 사용하여 1-2개의 부분 표본(각 0.1mL)의 공기를 분주합니다.
      메모: 이렇게 하면 카테터 내부에서 잔류 EBD 용액(또는 실험제)이 제거됩니다.
   5. 카테터를 빼낸 다음 30초 동안 마우스 위치를 유지합니다.
   6. 동물이 의식을 되찾을 때까지 따뜻한 담요 위에 동물을 눕힙니다. 복구는 일반적으로 2분 이내에 완료됩니다.
2. 원위 좌측 폐의 선택적 분절 캐뉼레이션에 대한 IB 접근법
   1. IT 캐뉼레이션을 수행한 후(주로 사용하는 손을 사용하여 확장된 카테터를 구강을 통해 기관으로 삽관) 플라스틱 보드를 -74° 회전합니다(그림 1B).
   2. 카테터의 허브를 잡고 부드러운 압력을 가하여 카테터를 왼쪽 주줄기 기관지로 전진시키면서 아래쪽(90°)과 북엔드 쪽으로 적당한 압력을 가합니다. 표 1에 표시된 깊이에서 작업자는 왼쪽 폐의 아래쪽 부분이 맞물릴 때 저항에 유의해야 합니다. 빈호흡이 발생하면 카테터를 20-25mm 위치로 빼고 다시 시도하십시오.
   3. 왼쪽 폐 아래 분절을 캐뉼레이션한 후, 제제 투여를 위한 중력 보조를 허용하기 위해 위치 변경이 필요합니다. 플라스틱 보드를 -30° 회전합니다(그림 1B).
   4. 겔 로딩 팁으로 40μL의 0.3% EBD를 제공합니다.
      메모: 왼쪽 폐에는 엽이 하나뿐이기 때문에 더 많은 양의 약제를 전달하는 것이 가능합니다.
   5. 유리 점적기를 사용하여 1-2개의 부분 표본(각 0.1–0.3mL)의 공기를 분주합니다.
      메모: 이렇게 하면 카테터 내부에 남아 있는 EBD(또는 실험제)를 제거할 수 있습니다.
   6. 카테터를 빼낸 다음 30초 동안 마우스 위치를 유지합니다.
   7. 동물이 의식을 되찾을 때까지 따뜻한 담요 위에 동물을 눕힙니다. 복구는 일반적으로 2분 이내에 완료됩니다.

결과

그림 1: 선택적 우측/좌측 폐엽 캐뉼레이션 및 투여를 위한 접근법.(A) 오른쪽 폐를 대상으로 하기 위해 플라스틱 보드를 +30° 회전하여 오른쪽 줄기 기관지를 선택적으로 결합하는 용이성을 향상시킵니다. 카테터는 (표 1에 제시된 거리에 따라) 우측 엽을 선택적으로 결합하기 위해 전진되어 있습니다. 20μL의 0.3% EBD를 투여했습니다. 시도의 ~90%에서 후엽은 캐뉼레이션됩니다. 나머지 10%의 시도는 하엽과 맞물립니다. (B) 왼쪽 폐를 대상으로 하기 위해 플라스틱 보드는 먼저 왼쪽 메인 스템 맞물림을 위해 -74° 회...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
22G 차폐 IV 카테터	BD (영어)	381423
에반스 블루 염료	시그마-알드리치	E2129
LED-30W 광섬유 듀얼 구즈넥 조명 현미경 조명기	암스코프	LED-30W
프리시전글라이드 니들, 18G x 1인치	BD (영어)	305195	베벨 팁, 길이 12mm