폐암종 세포의 3차원 배양: 세포-매트릭스 상호작용을 연구하는 방법

초록

출처: Chen, S. et. al. 폐 편평 암종 진행을 모델링하는 다차원 공동 배양 시스템. J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 세포-매트릭스 상호 작용을 연구하기 위한 폐암 세포의 3D 배양 기술에 대해 설명합니다. 이 프로토콜에서는 TUM622 폐암 세포의 3D 배양을 수행하여 in vitro에서 오가노이드를 형성할 수 있는 가능성을 탐구할 것입니다.

프로토콜

1. 2D 배양에서 TUM622 세포의 패시징 및 배양

1. 37°C에서 TUM622 세포를 위한 온열 3D 배양 배지 및 세포 해리 시약(재료 표 참조).
2. 2D 플라스크에서 80% 포화도의 TUM622 세포를 계대. 일반적으로 이것은 패싱한 지 1주일 후에 발생합니다.
3. T75 플라스크에서 오래된 배지를 버리고 6mL의 HEPES 버퍼로 한 번 세척합니다. 세포에 직접 피펫팅하지 마십시오.
4. HEPES 버퍼를 흡인합니다. 빠른 헹굼을 위해 4mL의 트립신/EDTA(0.25mg/mL, 재료 표 참조)를 추가하고 트립신/EDTA를 폐기합니다.
5. 트립신/EDTA 2mL를 추가하고 37°C에서 5분 동안 배양합니다.인큐베이터에서 플라스크를 제거하고 플라스크를 두드려 기포를 생성하지 않고 세포를 느슨하게 하고 플라스크를 추가로 5분 동안 인큐베이터에 다시 넣습니다.
   메모: 트립신에 장기간 노출되면 세포가 돌이킬 수 없는 손상을 입게 되고 표현형이 변하게 되므로 세포가 트립신에 노출되는 시간을 제한하는 것이 좋습니다.
6. 세포가 광학 현미경(4x 또는 10x)으로 분리 및 해리되었는지 확인합니다. 4mL의....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
기관지 상피 성장 배지	론자	CC-3170 BEGM
셀 스트레이너 40um	써모피셔	352340	TUM622 셀 통과용
쿨랙 CFT30	살생물제	BCS-138	3D 문화용
쿨싱크 XT96F	살생물제	BCS-536	3D 문화용
Cultrex 3D 세포 채취 키트	바이오테크네	3448-020-케이
Matrigel (단일 재배에 선호)	코 닝	356231	3D 문화용
Lab-Tec II 챔버 # 1.5 독일 커버 글라스 시스템	날지 눙크 인터내셔널	155409 (8)	3D 문화용
Lab-Tec II 챔버 # 1.5 독일 커버 글라스 시스템	날지 눙크 인터내셔널	155379 (2)	3D 문화용
ReagentPack 하대배양 시약	론자	CC-5034	TUM622 세포 해리의 경우

【무수정유출】