면역형광 분석법: 의료용 와이어에 포획된 종양 세포를 식별하는 방법

초록

출처: Gallerani, G. et.al., 순환 종양 세포 포획을 위한 의료 와이어를 사용한 종양 세포 특성화: 면역형광 및 DNA 물고기를 기반으로 한 3D 접근 방식. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 기능화된 의료 와이어에서 캡처한 순환 종양 세포의 면역형광 염색 기술에 대해 설명합니다. 기능화된 와이어를 통해 환자의 혈류에서 직접 생체 내에서 CTC를 분리할 수 있습니다.

프로토콜

1. Immuno-DNA FISH on Wire

1. 와이어의 세포주 스파이크인(3D 지원)
   메모: 예비 설정에는 EpCAM 양성을 기반으로 부착 세포주를 정확하게 선택하는 작업이 포함됩니다. 와이어는 항 EpCAM 항체로 기능화되어 EpCAM 양성 세포만 염색됩니다.
   메모: 손상을 방지하기 위해 전선의 기능적인 부분을 만지지 마십시오.
   메모: 모든 단계는 멸균 상태에서 층류 후드 아래에서 수행해야 합니다.
   1. 4mL의 완전한 배지를 사용하여 5mL 바이알에 T75 플라스크(80% 컨플루언스)의 전체 내용물을 재현탁합니다. 단일 스파이크인의 경우 와이어에 대한 세포 접착을 최대화하기 위해 약 2,000,000개의 세포가 권장됩니다.
   2. 유리 포장에서 와이어를 제거합니다.
   3. 와이어의 기능화된 금 부분을 바이알에 담그고 와이어 스토퍼가 바이알에 방수가 되도록 합니다. 실험실 필름으로 밀봉합니다.
      메모: 와이어 스토퍼와 바이알이 올바르게 일치할 수 있도록 5mL 튜브를 사용하는 것이 좋습니다.
   4. 튜브 로테이터(0....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
에탄올	카를로 에르바	# 414605
트윈 20	바이오 래드	# 1706531
PBS(인산염 완충 식염수)	메디카고	번호 : 09-9400-100
아세톤	시그마 알드리치	# 534064-500ML
고무 시멘트	로얄 탈렌스	# 95306500
EpCAM-FITC (클론: HEA-125)	미테니	#번호: 130-080-301
RPMI 1640	지브코	# 31870-025
XT 알크 BA	메타시스템 프로브	# D-6001-100-OG
Detektor CANCER01 EpCAM	Gilupi Nanomedizin		기능화된 와이어
ZEISS 형광 현미경 Axioskop	자이스
Nikon NIS-Elements BR 4.11.00 64비트 소프트웨어	니콘
Nikon DS-QiMc 12비트 디지털 카메라	니콘	DS-치맥

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