방법 논문

Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

DOI:

10.3791/2074

⸱

2011년 4월 18일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Pittsburgh, 2Department of Orthopedic Surgery, University of Aachen Medical Center

이 논문에서

요약

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Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델은, 늦은 용어 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. 이 문서는 여러 외상의 연구를 허용하는 실험 모델 조합의 가능성을 포함하여 단계 모델 단계의 절차 실행을 설명합니다.

초록

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외상 다음 여러 장기의 장애와 외상 환자에서 높은 사망률을 초래할 수있는 초기 하이퍼 반응 염증 반응이있다,이 반응은 종종 감염의 임상적 합병증을 추가 지연 immunosuppression 동반되며 사망률을 높일 수 있습니다 1-9가. 많은 연구 외상 다음 면역 체계의 반응에서 이러한 변화를 평가하기 시작했습니다. 10-15도
Immunologic 연구는 크게 유전자 변형 및 생체내 모델링에 사용할 수 녹아웃 마우스의 다양한 통해 지원되며. 자세한 조사에서 이러한 변종이 원조는 immunologic 응답에 관련된 분자 경로를 평가할 16-21

마우스의 파괴 고정 기술이 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다로서 실험 murine 외상 모델링에 도전, 장기 조사입니다. 22-30

마취의 지속, 장기간 사용하지 않고 동물과 장기 생존에 이동의 자유를 허용하면서이 pseudofracture 모델, 쉽게 복제 외상 모델은, immunologically 끝단 파괴 환경을 흉내낸하여 이러한 어려움을 극복. 목적은 긴 골절의 기능을 재현하는 것입니다, 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되어 있습니다.

hindlimbs에 양자 근육 호감 부상이 부상을 근육으로 뼈를 솔루션의 주입에 의해 다음 : pseudofracture 모델은 두 부분으로 구성되어 있습니다. 본 솔루션은 연령과 체중 일치 syngeneic 기증자 모두 hindlimbs에서 긴 뼈가 수확하여 준비가되어 있습니다. 이 유골은 다음 조각과 인산염의 resuspended하는 것은 뼈 솔루션을 만들 수 살린 버퍼.

양자 대퇴골 골절은 끝단 외상의 일반적으로 사용하고 잘 구축 모델이며, pseudofracture 모델의 개발 기간 동안 비교 모델. 우리가 멸균 아직 비례 심한 말초 조직 외상 모델을 원하는 사용 가능한 파괴 모델의 다양한 가운데, 우리는 pseudofracture 우리의 비교와 같은 부드러운 조직 손상과 파괴의 폐쇄 방법을 사용하기로 결정했습니다. 31

출혈성 쇼크가 심각한 외상의 설정에서 일반적인 발견이며, 세계 hypoperfusion는 외상 모델에 매우 관련된 요소를 추가합니다. 32-36 pseudofracture 모델이 쉽게 높은 심각도의 여러 외상 모델 출혈성 쇼크 모델과 결합 수 있습니다 . 37

프로토콜

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1. 악기, 외과 필드 준비 :

모든 실험 절차는 무균 기술을 사용하여 수행됩니다. 시작하기 전에 실험 지역은 철저하게 청소하고 소독해야합니다. benchtop은 공기 건조 후 70 % 알코올로 닦여 수, 소독해야합니다. 실험 작업 영역에 드레싱 수술 블루 패드 및 살균 필드를 배치합니다.

모든 자료와 악기 압력솥 사용하기 전에 소독을하고 있습니다. 주사기와 바늘은 멸균 접수하고 있습니다. 연구원은 적절하게 실험실 외투, 수술 마스크 및 불임 수술 장갑에 garbed해야합니다.

우리 수술 악기 압력솥 매일 저녁 소독하고 있습니다. 그들은 항균 비누와 물을 사용하여 수술 후 씻어입니다. 그들은 깨끗한 수술 블루 패드에 건조 사용할 수 있습니다. 그들은 다음 조심스럽게 살균 주머니에 배치하고 나중에 사용하기 위해 소독하고 있습니다.

° F 실험을 시작하기 전에 300-350 - 그것은 적절한 온도에 도달하기 위해 핫 비드 살균기를 켭니다. 이 살균기는 각각의 생쥐에 대한 실험 절차 사이에 악기를 청소하는 데 사용됩니다. 스테인레스 스틸 악기 트레이를 70 %의 에탄올과 방법과 그 1 / 3 입....

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토론

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Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델, 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. pseudofracture 모델 immunologically 긴 골절의 기능의 레크 리에이션을 통해 끝단 파괴 환경을 모방 : 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되는 38,39 biphasic 면역 반응은 다음과 같은 볼 수 있습니다. 48hrs 주변 여물로 묘사 지연 immunosuppression의 두 번째 구성 요소로 다음 6시간에서 절정을 볼 수있는 초기 hyperinflammatory 응답으로 구성되어 있습니다 pseudofracture 외상. 이 모델은 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다 이러한 파괴 - 고정으로 실험 murine 외상 모델링의 도전 중 일부를 극복하는 데 도움이됩니다. 그것이 원래 뼈의 골절없이 동물의 장기 생존을 허용으로 특히이 모델은 외상후 면역 반응이 늦은 기간 연구를 수 있습니다.

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공개 사항

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동물 실험 기관 애니멀 케어 및 사용위원회 및 연구 실시와 피츠버그 대학, AALAS / AAALAC 인증 기관의 준수 사무실에서 정한 지침과 규정에 따라 수행되었다. 동물 소스 잭슨 연구소와 찰스 리버스 연구소를 포함합니다. 모든 동물은 광범위한 건강 각 업체를 통해 보증뿐만 아니라, 피츠버그의 내부 동물 건강 모니터링 프로그램의 대학을 받고있다. 이 연구는 척추 동물의 사용에 대한 미국 정부의 원칙에 따라 실시됩니다. 이 프로그램은 USDA에 등록하고, 실험실 동물 복지의 보건 서비스 사무소와 보증의 편지를 가지고있다.

감사의 글

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출혈성 쇼크 GM053789의 기금 소스 / 번호 분자 생물학

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
외과용 블루 패드Fisher Scientific50-7105
멸균 필드 드레싱Fisher ScientificNC9517505
순환 가열 패드 18"x26"Harvard Apparatuspy872-5272
핫 비드 기기 살균기VWR international11156-002
스테인리스 스틸 트레이 8" x 11"VWR 국제62687-049
플렉시 유리 보드 (10x15x0.5cm) 피츠버그 대학교 기계 공장
테이프 롤 1 "기업 익스프레스MMM26001
50cc 원추형 튜브모든 공급 업체
스트레이트 사이드 와이드 입 항아리 (코 콘 캡으로 사용)VWR 국제159000-058
Oster A5 클리퍼스 w. 사이즈 40 블레이드VWR 국제10749-020
수술용 가위 (스트레이트 – 12cm)Fine Science Tools14068-12
헤모스탯 곡선형 -18cm하버드 장치81331718
펜치 (0.8mm-팁, 곡선형-10cm)Fine Science Tools11050-10
거즈 4"x4"모든 공급업체
1.5cc 마이크로퓨지 튜브모든 공급업체
얼음 양동이모든 공급업체
모르타르 및 유봉 Fisher Scientific12-961AA
1cc 주사기(25G 바늘 포함Fisher Scientific14-826-88
20G 바늘모든 공급업체
1mL 피펫맨모든 공급업체
1mL 피펫 팁모든 공급 업체
Falcon 폴리스티렌 8ml 튜브 VWR international60819-331
살균 파우치 3 "x8"VWR international24008
살균 파우치 5 "x10"VWR international24010
MacConkey II 한천 플레이트BD Biosciences221172
에틸 알코올 - 200 proof Pharmco-AAPER[70%]
Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution)OVATION Pharmaceuticals70mg/kg
Aerrane (Isoflurane)Baxter Internationl Inc.99.9%
트라이아딘 포비돈 요오드(베타딘)트라이어드 일회용품
인산염 완충 식염수(PBS)
부프레노르핀 HCl베드포드 연구소0.1mg/kg
, , )

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
  2. Deitch, E. A. Multiple organ failure. Pathophysiology and potential future therapy. Ann Surg. 216, 117-134 (1992).
  3. Carrico, C. J., Meakins, J. L., Marshall, J. C.

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재인쇄 및 허가

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