이 프로토콜에서는, 우리는 함께 축삭의 성장에 glial 세포 이질의 영향을 연구하는 새로운 방법을 설명 체외에서 공동 문화 시스템. 쥐 대뇌 피질의 glial 세포가 합류하는 교양과 고도의 쥐 등의 루트 신경의 신경을 정화와 cocultured되었습니다. 뉴런의 부착 및 축삭의 성장에 다른 glial 세포에 영향을 같은 문화에 직접적으로 비교했다. 이 방법은 직접적으로 신경 세포의 부착 및 축삭의 성장에 glial 세포 이질의 영향을 연구하는 새로운 방법을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
모든 포유 동물의 중추 신경계에 부상 후 절단 axons 1 매우 가난 원래의 목표와 기능 회복에 재생 수 없습니다. 축삭 재생의 실패는 적대적 glial 세포 환경 억제 myelin 관련 분자 및 내장 신경 세포 재생 능력이 감소 등 여러 가지 요인의 복합 결과입니다. Astrocytes는 중추 신경계에서 가장 지배 glial 세포 유형이며, 생리학 및 병리 조건 3 아래의 축삭 기능에 중요한 역할을한다. 동종 oligodendrocytes에 대비, astrocytes는 다양한 morphologies 및 유전자 발현 4 가지 astrocyte subpopulations로 구성된 이종 세포 인구입니다. 같은 축삭의 성장에 대한 자신의 영향으로이 이질의 기능적 의미는, 대부분 알 수 있습니다.
특히 glial 세포, 신경 세포의 동작 astrocyte 이질의 기능을 연구하기 위해, 우리는 쥐의 피질에서 얻은 glial 세포와 공동 culturing 높은 정화 등의 루트 신경의 신경에 의해 새로운 방법을 만들었습니다. 이 기법으로, 우리는 직접적으로 동일한 조건하에 다른 astrocytes의 subpopulations에서 신경 세포의 부착 및 축삭의 성장을 비교할 수 있었다.
이 보고서에서 우리는 astrocytes 절연 및 문화 등의 루트 신경 뉴런의 절연 및 정화하고, astrocytes와 뉴런을 DRG의 공동 문화에 대해이 방법의 상세한 프로토콜을 제공합니다. 이 방법은 뉴런과 glial 세포 사이의 세포 또는 지역 특정 상호 작용을 연구하는 다른 뇌 영역 확장 수 있습니다.
프로토콜
1. Glia 세포 문화
Glial 세포는 중추 신경계의 다른 지역에서 교양 수 있습니다. 전체 프로세스는 프로세스 그림에 표시됩니다.
1 일 코팅 문화 플레이트와 coverslips
- 건조 멸균 유리 현미경의 원형은 압력솥에 coverslips.
- 멸균 24 웰 플레이트에 문화 플레이트 살균 coverslips.
- 코팅 폴리 - 라이신과 루트 온도에 따라 2 시간 동안 부화와 coverslips.
- 3 단계와 같은 방식으로 코트 6 - 웰 문화 번호판입니다.
- 증류수와 문화 후드의 건조 공기를 두 번 coverslips 6 - 글쎄 문화 플레이트 씻으십시오.
- 5 % CO 2와 37 정도에 따라 6 자 판 24 - 잘 판 각 잘 2 ML 각 물론 200 μL DMEM 매체를 (10 ....
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토론
이 실험 프로토콜은 glial 세포, 신경 세포의 부착 및 neurite 성장에 특히 astrocyte 이질의 영향을 연구하는 두 목표를 달성하도록 설계되었습니다. 첫 번째 목표는이 실험에서 astrocyte 이질 최대한을 유지하는 것이었다, 합류 glial 세포 배양 농축 astrocytes는 더욱 세포를 손상 astrocytes의 부상 반응을 유발 수있는 화학 치료 및 소화 전파없이 기본 문화를 혼합했다. 최종 astrocyte 순도가 fibrobasts FN 의해 검증으로 1 % 미만 오염 섬유아 세포와 90 % 이상 GFAP 양성입니다. 처음 만들어진 세포에서 낮은 시딩 밀도는 합류하기 전에 부서의 여러 순찰을 받고있다. 위상 콘트라스트 현미경, glial 세포 이질이 다른 형태학의 astrocytes에 의해 형성된 여러 가지 기초 공사에 의해 관찰되었다. 두 번째 목표는 높은 정화 DRG의 뉴런을하는 것이었과 뉴런의 행동에 이질의 영향을 연구 glial 세포와 그들을 coculture. 이러한 섬유아 세포 및 schw.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 연구는 FMMU 새로운 재단과 부분적으로 NIH의 기금을 찾는 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | |
| L15 배지 | Invitrogen | 11415-114 | |
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | |
| Neurobasal 배지 | Invitrogen | 21103-049 | |
| poly-lysine | Sigma-Aldrich | P4832 | 배양 등급 |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | |
| B27 보충제 | Invitrogen | 17504-044 | |
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | |
| FUDR | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| neurofilament 항체 | Abcam | ab24575 |
참고문헌
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move? J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A.
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재인쇄 및 허가
