Method Article

휴일 두개골 윈도우를 사용하여 마우스 뇌 엑기스의 Intravital 현미경

DOI:

10.3791/2184

⸱

November 18th, 2010

 , 
1Bioengineering, University of California, San Diego, 2La Jolla Bioengineering Institute

In This Article

Summary

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pial 엑기스의 시간적 및 공간적 hemodynamic 및 염증성 이벤트를 따라 Intravital 현미경.

Abstract

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이 실험 모델은 생체내 형광 현미경을 사용하여, 급성과 만성, 생리학 및 pathophysiological hemodynamic, 염증 및 대사 조건 중에 마우스 pial 엑기스를 평가하도록 설계되었습니다. 폐쇄 두개골 창이 생쥐의 왼쪽 parieto - 후두 피질을 통해 배치됩니다. 지역 엑기스는 에피와 형광 조명하고, 혈관의 직경 및 적혈구 세포 (RBC) 판매율이 수행되는 측정을 사용하여 창문을 통해 실시간으로 기록됩니다. RBC 속도는 실시간 상호 상관 및 / 또는 형광 라벨이 표시된 적혈구를 사용하여 측정됩니다. 재관류과 혈관 누출의 pial 선박 및 평가 백혈구와 혈소판 준수는 그러한 알부민 - FITC 및 안티 CD45 - TxR 항체로 형광 라벨이 표시된 마커의 도움으로 만들어집니다. 엑기스 반복 며칠 동안 비디오 녹화하실 수 있습니다. 우리는 처음으로 생쥐에서 Plasmodium berghei 앙카 감염의 과정 동안 역동적인 변화를 따라 CM의 표현이 혈액에 깊은 감소, vasoconstriction의 특징 microcirculatory 기능 장애와 관련된 것을 보여주기 위해 pial 엑기스를 연구하기 위해 창 닫기 두뇌 intravital 현미경에 사용 흐름과 혈관 결국 붕괴.

Protocol

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1. Craniotomy

8 대 10 주 된 생쥐의 craniotomy은 티타늄 바에는 동물의 머리에 배치 아니라는 것을 제외하고, 이전에 설명한 1로 사전에 수행되어야합니다. 만성 두개골 창문조차 개월 이식 후에 pial 엑기스의 안정적인 준비 있도록 시험입니다. 보통, 우리는 2-3 주 두개골 창 주입 후 우리의 연구를 수행합니다.

2. Intravital 현미경

  1. 두 - 3 주 craniotomy 후 체온을 선택한 다음 마우스로 가볍게 anesthetized입니다 isoflurane (유도 4 %, 유지 보수 1-2 %). 라이트 마취는 실험 절차를 수행하는 동안 동물의 스트레스와 불편을 방지하는 데 사용됩니다.
  2. 동물은 다음 stereotaxic 프레임과주의 깊게 귀 막대를 사용하여 보안 머리에 발생하기 쉬운 위치에 배치됩니다. 수준은 오른쪽과 왼쪽 레버를 사용하여 조정됩니다. 핵심 체온은 가열 패드를 사용하여 유지됩니다. 대뇌 말라리아와 쥐가 저체온증을 개발하기 때문에, 온도 설정은 각각의 동물에 따라 조정해야합니다.
  3. 두개골 창문에 커버 슬립이 부드럽게 면봉은 광유와 창 아래에있는 혈관의 파노라마 사진이 ster....

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Discussion

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여기에서 설명한 intravital 현미경 메서드는 마우스의 pial 엑기스에 대한 자세한 관찰을위한 독특하고 강력한 도구를 제공합니다. 그것은 다른 개인 arterioles 및 venules 뽑아 내서와 같은 혈관 직경, RBC의 판매율, 혈액의 흐름, 준수 및 leukocytes, 혈소판 및 기타 혈액 요소, 혈관 누출, 조직 산도와 pO2의 압연과 같은 매개 변수의 개수의 변화를 측정 수 있으며 잠재적으로 여러 응용 프로그램입니다. 생체내 혈관 반응은 신속 같은 약물 관리 등 중재에 따라 평가, 또는 병적인 과정 동안 수 있습니다. 또한, microcirculatory 동작은 동적으로 시간이 지남에 따라 최대 수 있습니다. 우리는 P.으로 인한 뇌성 말라리아 동안 pial microcirculatory 변화를 연구하기 위해이 기술을 사용한 berghei 마우스에 앙카, 그리고이 모델의 신경 증후군이 감소 대뇌 혈류, vasoconstriction, 장애인 재.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Acknowledgements

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이 작품은 LJMC으로 국립 보건원에서 보조금 R01 - HL87290, R01 - HL87290 - S1과 R01 - AI082610에 의해 지원되었다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
박스터 인터네이션 Inc.
카르보시아닌 염료 Dil Molecular Probes, Life TechnologiesD306
Albumin-FITCSigma-AldrichA9771
Anti-CD45-TxR AbInvitrogenMCD4517
P. berghei ANKA-GFPMR4MRA-865
FDG9623

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
  2. Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
  3. Briceno, J. C., Cabr....

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Intravital MicroscopyMouse Brain MicrocirculationClosed Cranial WindowPial VesselsRed Blood Cell VelocityLeukocyte AdhesionFluorescent LabelingCerebral MalariaPlasmodium BergheiBlood Flow Measurement

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