휴대 전화의 Macromolecular 교통 분석 Planta에 Biolistic 포격을 활용

요약

식물 세포 사이 Macromolecular 거래는 transiently 관심 찬란 - 태그 단백질을 표현하고 공촛점 현미경하여 내부와 세포 분포를 분석하여 평가하실 수 있습니다.

초록

여기, 우리는 planta에서 휴대 전화의 macromolecular 수송의 범위를 감지하고 평가하는 간단하고 빠른 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜에 관심이 찬란 태그 단백질은 transiently의 인코딩 DNA의 전달 구조 biolistic 다음과 식물 조직에 표시됩니다. 태그 단백질의 내부 및 세포 분포는 다음 공촛점 현미경으로 분석됩니다. 우리는 분석하기 위해 단계별 절차를 제공 세부 사항이 기술을 설명하는 세 식물 종 (种)의 symplastic 단백질 수송의 범위, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana 및 N. 평가 tabacum (담배).

프로토콜

배경

식물 세포 연결을 통해 macromolecules의 Symplastic 교통, plasmodesmata는 많은 식물 병리학과 생물학에 관심이 있습니다. 예를 들어, 여러 바이러스 단백질은 바이러스 운동 ^1-3 있도록 plasmodesmal 크기 제외 한도를 규제하는 것으로 알려져 있습니다. 또한, 그들이 중요한 발달 규제 중 일부 내생 단백질은, 비 셀 자율적으로 ⁴ 기능, 아마도 plasmodesmata을 통해 세포에서 세포로 이동 간주됩니다. 따라서 식물 세포 사이의 macromolecular 운송을 파악하고 시각화하는 신뢰할 수있는 방법론이 훨씬 수요에 있습니다.

1) 대상 식물을 성장

높은 변환 효율을위한, 건강, 강력한 식물을 사용해야합니다.

1. Arabidopsis 식물

짧은 photoperiod (130-150 μE m ^{-2 -1의} 빛 8 시간 23 °와 환경 제어 챔버의 냄비에 프로 믹스 BX 한 Arabidopsis 공장 (10cm X....

토론

symplastic 교통 분석의 성공에 대한 열쇠는 통계적으로 중요한 쉽게 detectible 신호 클러스터의 생산을 허용 높은 변환 효율을 얻을 수 있습니다. 이것은 건강, 강력한 식물에서 수확한 잎을 사용하고 순수하고 집중 DNA 준비로 코팅된 금 입자를 준비 얻을 수 있습니다.

같은 성장 단계에서 나뭇잎을 사용하면 분석의 신뢰성을 위해 매우 중요합니다. Plasmodesmal 조리개는 differentially 조직 ^7-11의 발달 단계에 따라 규제 것으로 알려져있다. 많은 식물의 종류 단풍의 기초 ¹² 부보다 더 성숙되고있는 잎의 꼭대기의 일부로, 꼭대기에서 기지로 basipetally 개발할 수 있습니다. 따라서, 실험의 각 집합에 대해 선택한 단풍 (보통 자신의 크기와 줄기에 위치하여 반영)의 발달 단계뿐만 아니라 동일해야하지만, microbombardment 대상 잎 영역은 동일한 위치에 위치해야합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
금 미립자, 직경 1.0 μm	Bio-Rad	165-2262
금 미립자, 직경 0.6 μm	Bio-Rad	165-2263
Spermidine	Sigma-Aldrich	S0266-1G
Tefzel 튜브	Bio-Rad	165-2441
Helios 카트리지 준비 스테이션	Bio-Rad	165-2420
튜브 커터	Bio-Rad	165-2422
Helios 유전자 총	Bio-Rad	165-2432
헬륨 가스 조절기	Bio-Rad	165-2413