이 동영상은 midgastrula 무대 Drosophila의 배아에서 기본의 연결을 문화의 준비를 보여줍니다. 라이브 문화의 전망 중탄산염 기반 정의 매체 성장 2 일 후에 도금과 차별화된 뉴런 후 세포를 1 시간 보여줍니다. 뉴런은 전기 고르기하고 시냅스 연결을 형성합니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 동영상은 midgastrula 무대 Drosophila의 배아에서 기본의 연결을 문화를 만들기위한 절차를 설명합니다. 표백제를 사용하는 배아하고 dechorionation를 수집하기 위해 방법은 증명하고 있습니다. 입 흡입 튜브에 부착된 유리 pipet을 사용하여, 우리는 하나의 배아에서 세포의 제거를 보여줍니다. uncoated 유리 coverslip에 대한 매체의 작은 (5 L) 드롭으로 각 embyro에서 세포를 분산하는 방법을 시연합니다. 도금 후 1 시간에 현미경을 통해보기 원하는 세포 밀도를 보여줍니다. 정의 매체 자라면 생존 세포의 대부분은 12-24시간로 neuritic 프로세스를 확장하기 전에 문화를 한 번 이상 나누어 neuroblasts 있습니다. 현미경을 통해 볼 수 neurite 가지의 수준을 보여줍니다과 체외에서 이일에 건강한 문화의 예상 분기. 문화가 22-24 ° C.에서 5 % CO 2 배양기에서 정의된 매체를 기반으로 간단한 중탄산염에서 재배 Neuritic 프로세스는 문화의 첫 번째 주 동안 정교한 계속하고 그들은 종종 기능 시냅스 연결을 형성 인접 세포에서 neurites과 접촉을 때. 이러한 문화의 뉴런 전압 - 게이 티드 나트륨, 칼슘, 그리고 칼륨 채널을 표현하고 전기 고르기가 있습니다. 이 문화 시스템의 연결을 차별화, 흥분, 그리고 버렸네 형성 / 기능을 조절 분자 유전과 환경 요인을 공부하는 데 유용합니다.
프로토콜
I. Drosophila의 배아 컬렉션
- 달걀 수집 번호판을 준비
- 8g의 한천과 함께 삶아 200 ML DH 2 O
- 50 쿨 ° C
- 2 ML EtOH 2 ML 초산 추가
- 35mm 플라스틱 배양 접시, 정상에 따르다
- 4 쿨 공기 꽉 컨테이너에 가게 ° C
- 약 80 접시를 만듭니다
- 효모 붙여넣기 준비
- 붙여넣기 양식 물에 Fleishmans 적극적인 제빵 효모를 디졸브
- 누룩을 죽일 20-30초에 대한 마이크 로파 (끓어에 대한 조심)
- 4 ° C에 대한 이주 10 CC 주사기 (바늘없이)에 저장
- 파리 : 달걀 수집에 사용되는 어른들이 신선한 음식에 접근할 수 있었 것을 제공하고, 3시 사이에 14 일 신흥 후 일반적으로 가장 비옥한 있습니다. 대부분의 돌연변이 주식 계란 누워있는 그들이 가장 생산되는의 시대에 변화의 인하 속도에 자신을 매니 페스트 수 있습니다 다산을 감소했습니다. 일반적으로, 수백 성인은 좋은 계란 - 누워있는 인구에 대한합니다.
- 절차 : 달걀 수집 접시에 붙여넣 효모의 얇은 레이어를 펴. 이것은 계란....
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토론
midgastrula 스테이지 배아에서 준비 Drosophila 문화에서 뉴런은 체외에서 분화하기 전에 분할 많은 중 neuroblast의 엽 성의 전구 물질에서 발생. 이 시스템의 연결을 따라서 개발의 매우 초기 단계 (로보어 외., 2003)에서 중요한 유전과 환경 요인의 탐험에 대한 독특한 기회를 제공합니다. 우리는 간단한 정의 매체 성장 뉴런도 (; 리 O 다우드, 1999 O 다우드, 1995) 기능 시냅스 연결을 형성 전기 고르기 뉴런으로 차별화하는 것으로 나타났습니다. .이 모델 시스템은 전기 흥분과 시냅스 전송 (하지스 외, 2002 년 개발에 관련된 역할 유전자와 환경 요인을 탐구하는 데 사용할 수있는 표준 전체 세포 녹음 기술과 함께, 돌연변이 및 / 또는 약리 조작의 분석을 사용하여, 리 그리고 O 다우드, 2000; 리 외, 2003)..
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감사의 글
이 작품은 DKOD에 NIH 부여 NS27501에 의해 지원되었다. HHMI 교수 부여에서 DKOD이 작업에 대한 추가 지원합니다.
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재료
이 미디어에서 만든 문화는 약 22-24 ° C.에서 5 % CO2 배양기에서 유지되어야합니다 우리는 인큐베이터가 추운 방에 배치 표준 포유류의 조직 문화를 사용하여 23 ° C.으로 가열 항상 autoclaved 여과 물, 미디어 및 보충만을 위해 예약된 컨테이너에서 확인를 사용합니다. 산도 측정기를 넣어하거나 미디어에 다른 목적으로 사용되는 막대를 저어 마십시오.
참고문헌
- Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System. J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).
- O'Dowd, D. K.
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재인쇄 및 허가
