교모세포종 마우스 모델에서 유연한 생체 적합성 프로브 이식

초록

출처: Lefevre, MC, et al., 교모세포종의 펄스 전기장 치료를 위한 유연한 유기 전자 장치. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 신경 치료 응용 분야를 위한 표적 펄스 전기장 요법을 제공하기 위해 교모세포종 마우스 모델에 유연하고 생체 적합성 프로브를 이식하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생체 내 모델
   참고: 성인 다색 형광 AMU-Neuroinflam 마우스(B6. Cg-Tg(Thy1-CFP)23Jrs(Ly6a-EGFP)G5Dzk(Itgax-EYFP)1Mnz/FD)를 사용했습니다. 이 마우스는 ECFP의 형질전환 발현에 의한 Thy1⁺ 뉴런의 하위 집단의 표지, EGFP의 형질전환 발현에 의한 말초 LyzM⁺ 염증 세포의 표지 및 Cd11c⁺의 제어 하에 EYFP를 발현하는 미세아교세포의 하위 유형의 표지를 나타냅니다. 간단히 말해서, 동물은 치료 또는 주사 전에 2분 동안 1.5% 이소플루란으로 가볍게 진정됩니다. 수술 전에 동물은 케타민(120mg/kg; IP) 및 자일라진(12mg/kg; IP)를 사용합니다. 그런 다음 정위 지지대 고정과 관련된 귀의 통증을 완화하기 위해 3% 리도카인 젤을 국소적으로 도포합니다. 그런 다음 개두술로 인한 통증을 완화하기 위해 수술 부위에 0.25% 부피바카인 용액을 투여합니다. 마우스가 수술을 위해 준비되면 직경 4mm의 개두술을 시행했습니다. 26G 바늘로 개두술 중간에 경막에 구멍을 뚫고 주입 시스템으로 종양 스페로이드를 주입했습니다. 또한, 여기에 설명된 바와 같이, 개두술을 유리창으로 밀봉하기 전에 종양 스페로이드를 발현하는 GCamp6 또는 DsRed에 유연한 전극을 배치했습니다.
   1. Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)를 한 방울 떨어뜨려 개두술을 덮도록 합니다. 유연한 전극을 DPBS 방울 위에 놓고 접촉 패드가 있는 프로브 뒷면을 마우스 뒷면에 부드럽게 놓습니다(그림 1B).
      참고: 멸균 장갑과 "팁만" 기술을 사용하십시오. 멸균되지 않은 표면에 닿은 경우 장갑을 교체하십시오. 이 절차 중에 열 지원을 제공하십시오.
   2. 프로브가 경막에 평평하게 놓이고 뇌의 곡률을 따라갈 수 있을 때까지 DPBS를 흡수하기 위해 작은 종이로 DPBS 방울을 만집니다. DPBS의 작은 층이 전극 측면에서 빠져나가지 않고 전극 아래에 남아 있는지 확인하십시오. 이렇게 하면 다음 단계에서 접착제 유출에 대한 장벽이 보장됩니다.
      알림: 사용하기 전에 모든 장비를 소독하십시오.
   3. 프로브에 실리콘 접착제를 작은 방울로 떨어뜨리고 5mm 원형 커버 유리로 덮습니다. 실리콘이 고르게 분포되고 커버 유리와 프로브 사이의 거리가 최소화될 때까지 커버 유리를 아래로 밉니다. 실리콘이 굳을 수 있도록 커버 유리를 30초 더 아래로 밉니다.
   4. 커버 유리를 고정하려면 측면에 초강력 접착제를 빠르게 바르고 접착제가 고체로 경화될 때까지 아래로 누릅니다.
   이
   5. 쑤시개를 사용하여 프로브의 목에 초강력 접착제를 바르고 초강력 접착제가 목 아래로 당겨져 안정적으로 지지되도록 합니다.
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   6. 개골을 치과용 시멘트로 덮어 만성 캡을 만듭니다. 커버 유리의 가장자리만 덮도록 각별히 주의하십시오.
   7. 프로브 뒷면을 들어 올리고 목 아래에 시멘트를 바릅니다. 경화되기 전에 프로브를 시멘트 위에 올려 놓습니다. 실험 중에 표면이 커버 유리와 같은 높이에 있고 실험 중에 현미경 대물렌즈를 방해하지 않도록 무딘 집게로 프로브의 목을 부드럽게 아래로 누릅니다.
   8. 프로브를 단단히 고정하기 위해 프로브 넥 상단을 1.5mm 이하의 치과용 시멘트 층으로 덮습니다. 커버 유리 주위 1-2mm 거리에 1.5mm 능선을 제시하는 시멘트 우물을 만들어 2광자 이미징을 위한 침지 유체를 위한 분지를 만듭니다(그림 1C).
   9. 시멘트가 경화된 후 부프레노르핀 수술 후 진통제(0.05mg/kg, 체중 10g당 0.1mL를 피하 투여)하고 동물이 깨어날 때까지 따뜻한 분위기에 유지합니다. 여기에는 적외선 전구에 근접하고 동물을 종이 타월로 감싸는 것이 포함됩니다.
      알림: 온도계를 마우스 높이에 놓아 온도를 모니터링합니다.
   10. 전위차계를 사용하여 1-10kHz 범위의 임피던스를 특성화합니다.
   11. 동물이 수술에서 최소 10일 동안 회복되도록 하십시오. 수술 직후 항염증제를 투여하고 동물의 상태를 계속 모니터링하여 적절한 수술 후 진통을 제공하십시오.

결과

그림 1: 생체 내 애플리케이션. (A) 생체 내 실험을 위한 계획. (B) 커버 유리와 아크릴 수지를 도포하기 전에 프로브 배치. (C) 프로브 이식 완료.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
크릴 수지	Fischer scientific	NC1455685
Buprenorphine	Axience
Lab에서 만든 펄스 발생기
페니실린 / Streptomycin	Gibco	15140-122
인산염 완충 식염수	Thermofisher	D8537
Protolaser S	LPKF
원형 커버 유리 직경 5mm	Fischer scientific	50-949-439
실리콘 접착제 Kwik-Sil	World Precision Instruments
슈퍼 접착제	사무실 창고
U87-MG	ATCC	HTB-14	인간 교모세포종 세포

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