마우스 모델에서 비침습적 신경조절을 위한 안과용 약물 전달

초록

출처: Zhan, J., et al. DREADD로 제어되는 신경 활동의 만성 조작을 위한 비침습적 전략. J. Vis. Exp. (2019)

이 비디오는 표적 신경 조절을 위한 비침습적 안과 약물 전달 방법을 보여줍니다. 약물은 점안액을 통해 전달되어 순환계로 흡수되어 혈액뇌 장벽을 통과하고 특정 신경 수용체를 활성화합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 점안액을 이용한 반복적인 클로자핀-N-옥사이드(CNO) 전달

안

1. 약을 투여하기 전 3-4일 동안 매일 3분씩 각 마우스를 찡그러뜨려 동물을 취급에 적응시킵니다.
2. 클로자핀-N-옥사이드(CNO, 5mg)를 멸균 0.9% 식염수 1mL(원액: 5mg CNO/mL)에 녹입니다. 용액을 4°C에서 냉장 보관하십시오.
3. 실험을 시작하기 전에 각 마우스의 무게를 측정하여 전달할 CNO의 양을 결정합니다. 1.0mg CNO/kg 체중을 달성하기 위해 1-3μL 방울(눈당 )을 사용합니다.
   참고: 예를 들어, 20g 마우스는 양측(각각 2μL) 점안액을 받아야 합니다.
4. 생쥐의 비활성(빛) 단계에서 조명이 꺼지기 2시간 전(zeitgeber time(ZT) 10)에 점안액을 전달합니다. 생쥐의 활동(어두운) 단계에서 CNO를 전달해야 하는 경우 적절한 동물 취급을 위해 희미한 적색광이 있는지 확인하십시오.
   참고: 실험 동물의 일주기(및 빛/어둠) 주기를 방해하지 않도록 예방 조치를 취해야 합니다.
   1. P10 마이크로피펫을 사용하여 필요한 양(1-3μL)의 CNO 용액을 로드하여 1.0mg CNO/kg을 달성합니다.
      참고: 각 점안액에 새 멸균 피펫 팁을 사용하십시오. 이 일련의 실험에서는 CNO의 양측 점안액을 수행했습니다. 그러나 더 낮은 CNO 농도가 필요한 경우 일방적인 점안액을 적용할 수도 있습니다.
   2. 목덜미를 통해 마우스를 고정합니다.
   3. 피펫 팁에 안정적인 물방울이 형성될 때까지 용액을 천천히 배출합니다.
   4. 용액이 전달될 때까지 물방울을 마우스 눈의 각막에 조심스럽게 가까이 가져갑니다. 피펫 팁이 마우스의 눈에 닿지 않아야 합니다.
   5. 마우스를 놓고 홈 케이지에 다시 넣습니다.
5. 5일 동안 매일 이 절차를 반복합니다.
   참고: 이 기간은 실험 요구 사항에 따라 조정할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
BSA	Sigma 생명 과학	#A2153-100G	동결건조 분말≥96%(아가로스 겔 전기영동)
C57BL/6J 마우스	잭슨 연구소	#000664	수컷 마우스, 3개월 모
세혈관	드러먼드 과학 회사	#3-000-203-G/X	외경: 1.14인치
클로자핀-N-옥사이드	시그마	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	이소플루란, USP
마이크로인젝터 III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - 프로그래밍 가능한 나노리터 인젝터
마운팅 미디어	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold 퇴색 방지 시약