Cisterna Magna Injection을 통한 마우스 모델의 표적 약물 전달

초록

출처: Zamboni, M., et al., induction of leptomeningeal cells modification by cisternal injection. J. Vis. 경험. (2020년)

이 비디오는 마취된 마우스의 수조에 유도 약물을 전달하는 절차를 보여줍니다. 주사는 형광 영상으로 확인된 뇌척수액을 통해 접근할 수 있는 뇌 표면 세포에서 형광 마커 발현을 선택적으로 유도합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 시술을 위한 동물의 위치 지정

1. : 동물의 머리를 머리 홀더에 고정합니다. 수조 마그나에 대한 접근성을 향상시키려면 동물의 몸을 테이블 표면에서 약 30° 각도로 배치하고 머리를 아래쪽으로 설정하여 신체의 나머지 부분과 120° 각도를 설정하고 목 뒤쪽을 확장하여 수조 마그나에 쉽게 접근할 수 있습니다(그림 1A).
2. 시술 내내 몸을 지탱하기 위해 동물 아래에 종이 타월을 추가하십시오.
3. 마우스피스를 통한 마취 전달을 확보하고 이소플루란 농도를 2.5%로 줄이고 공기 전달을 200ml/min으로 줄입니다.
4. 안과용 연고를 바르십시오.

2. Cisterna Magna의 노출

1. 동물의 목 뒤쪽을 면도하고 70% 에탄올과 베타딘으로 해당 부위를 소독합니다.
2. 수술용 가위를 사용하여 후두골 높이에서 시작하여 후방으로 확장하는 정중선 절개(길이 약 7mm)를 수행합니다.
3. 표면 결합 조직과 목 근육을 부드럽게 분리하고 끝이 가는 핀셋으로 정중선에서 옆으로 당깁니다. 이렇게 하면 역삼각형 모양의 저수조를 덮고 있는 경막막이 노출됩니다.
멸
4. 균 흡수 창이나 면봉을 사용하여 출혈을 조절하십시오.
5. 목 근육을 옆으로 당겨진 상태를 유지하고 시술 전반에 걸쳐 수조를 시각화할 수 있도록 작은 수술용 분리기를 배치합니다.

3. 수흉골내 주사

수

1. 조에 접근하려면 후두골의 꼬리 끝을 식별하고 이전에 구부러진 바늘을 바로 아래에 삽입합니다.
   참고: 경막막에 구멍이 뚫리면 저항이 갑자기 떨어집니다. 그러나 바늘 끝은 갈고리 모양 덕분에 수막 표면 아래까지만 침투합니다.
2. 경막에 구멍이 뚫리면 바늘을 두개골에 "걸고" 주사기를 위쪽으로 부드럽게 당겨 동물의 몸과 평행하게 바늘의 구부러진 끝이 경막 표면 아래로 침투하도록 합니다(그림 1B 참조). 이렇게 하면 더 나은 안정성이 보장되고 바늘이 더 깊숙이 침투하는 것을 방지하여 밑에 있는 소뇌나 수질이 손상될 위험을 피할
수 있습니다.
3. 뇌척수액의 자연스러운 흐름을 방해하지 않도록 화합물을 천천히 주입하십시오.
   참고: 실험 목적에 따라 주입 속도가 달라질 수 있습니다. 느리고 꾸준한 주입 속도가 필요한 경우(예: 뇌척수액 움직임을 추적하는 절차를 사용할 때) 주사기와 함께 자동화된 미세 주입 시스템을 사용하는 것이 좋습니다.
4. 주사 후 바늘을 부위에 1분 동안 그대로 두었다가 조심스럽게 제거합니다. 끝이 가는 집게를 사용하여 바늘이 갈고리 위치에서 후퇴하는 데 도움을 줍니다.
   참고: 얇은 바늘(예: 30G)을 사용해도 수막막이 크게 손상되고 결과적으로 뇌척수액이 유출되지 않습니다. 더 큰 바늘 크기가 필요한 경우 멸균 면봉 팁을 사용하여 주사 부위에 압력을 가하여 체액 누출을 막는 것이 좋습니다.

결과

그림 1: 엔독시펜의 수흉개 내 주사를 통한 연수막 세포의 특이적 라벨링. 패널 A와 B는 시낭내 투여를 위해 개발된 절차를 보여줍니다. 수조에 접근하려면 목 뒤쪽을 늘려야 합니다. 따라서 마취된 동물은 몸과 머리 사이에 약 120° 각도로 위치하며 아래쪽으로 기울어져 있습니다(A). 갈고리가 달린 바늘을 사용하면 주사기를 두개골에 고정하...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마취 장치	Univentor 410	8323102	챔버 및 마우스 헤드 홀더에 연결되는 기화기, 챔버 및 튜브 완성
취(이소플루란)	Baxter Medical AB	890
베타딘	Sigma-Aldrich	PVP1
Endoxifen	Sigma-Aldrich	E8284
에탄올 70%	Histolab	1370
해밀턴 주사기(30G 경사진 바늘)해	밀턴	80300
마우스 헤드 홀더	Narishige International	SGM-4	흡입 무감각제용 마우스피스 포함. 또는 정위 프레임을 사용하십시오
위	Fine Science Tools	15009-08
면도기	Aesculap	GT420
멸균 흡수 창	Fine Science Tools	18105-01	멸균 면봉도 좋은 선택입니다
용 분리기	World Precision Instrument	501897
핀셋	듀몽	11251-35

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