외상성 뇌손상이 있는 마우스에 신경 세포 현탁액의 정위 이식

초록

출처: Furmanski, O., et al. 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 신경 세포의 치료적 이식을 통한 마우스 뇌 손상의 제어된 피질 충격 모델. J. Vis. 경험. (2019년)

이 비디오에서는 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 신경 세포를 심부 피질의 회백질-백질 경계에 입위적으로 주입합니다. 이식된 세포는 조직에 통합되어 손상된 뇌의 기능 회복과 회로 복구를 촉진합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포 현탁액의 정위 이식

두

1. 개골 절제술 후 약 24시간 후에 세포 이식 절차를 시작합니다.
2. 세포 이식 장비 및 수술 용품을 준비합니다
   1. 상처 세척을 위해 1mL 슬립 팁 주사기에 멸균 식염수를 채웁니다. 관개를 제어하기 위해 주사기에 25G 바늘을 부착합니다.
   2. 면역 억제를 위해 1mL 슬립 팁 주사기에 CsA(사이클로스포린 A) 용액을 채웁니다. CsA 주사기에 25G 이상의 바늘을 부착합니다. 수술 사이에 필요에 따라 CsA 주사기를 리필하십시오.
   3. 표준 방법을 사용하여 1.0mm OD(외경) 붕규산 유리 모세관 피펫에서 유리 바늘을 준비합니다.
   4. 가는 핀셋을 사용하여 바늘 끝을 약 200μm 직경으로 부릅니다. 바늘의 원통형 샤프트가 2.5cm를 넘지 않는지 확인하십시오.
3. 10μL 주사기와 함께 사용할 수 있도록 주사기 펌프를 보정합니다. 0.2 μL/min의 유속을 입력하면 총 부피가 2.0 μL입니다.
4. 인간 유도만능줄기세포(hiPSC) 현탁액을 준비합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1ml 주사기	Becton Dickinson(BD)	309659
1.7ml 플립탑 시험관	Denville	C2170
10마이크로리터 주사기	해밀턴	7635-01
25G 정밀 글라이드 주사기 바늘	벡톤 디킨슨(BD)	305122
70% 에탄올			선택 제품; 지역에 따라 다름
아세트아미노펜 경구 현탁	타이레놀(어린이용)		물에서 1mg/ml로 희석
마취 기화기	Vetland	0521-11-22
동물 취급 천			백화점에서 구매
Betadine	Purdue Products	NDC-67618-151-32
압축 산소			선택 제품; 지역에 따라 다름
사이클로스포린 A	시그마-알드리치	30024-100mg
디메틸 설폭사이드(DMSO)	시그마-알드리치	D8418-500ml
DMEM	Invitrogen (ThermoFisher)	A14430-01
전기 테이프	3M Corporation		백화점에서 구매
고급 핀셋	Fine Science Tools	11254-20
겸자	Fine Science Tools	91106-12
유리 모세관 피펫, 1mm OD, 0.58mm ID	World Precision Instruments	1B100F-3
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임팩트 1 CCI	카 바이오시스템	39463920
이소플루란	박스터	NDC-10019-360-60
실험실 벤치 타이머	피셔 사이언티픽	14-649-17
마이크로피펫 풀러	MicroData Instruments, Inc.	PMP-102	모든 풀러로 충분합니다
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