$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
8주령 성인 수컷 C57BL/6N 마우스를 사용하였다.
1. 수술 전 설정
- 고압멸균, 멸균된 수술 기구, 장비, 진통제 및 마취제의 적절한 재고를 확보하십시오.
- 수술대에 적절한 작업 공간을 확보하십시오.
- 기저귀로 덮인 맞춤형 수술용 폼 보드를 마우스 침대로 사용하여 수술대를 준비합니다. 멸균 거즈로 덮인 의료용 테이프로 발포 보드에 보온 패드를 고정합니다.
- 혈관 겸자를 사용하여 침술 바늘을 구부리고 반으로 접은 다음 접힌 침 바늘의 끝을 갈고리로 구부려 견인기를 만듭니다. 침 끝에 고무 스트립을 고정하고 압정을 사용하여 고무 스트립 끝을 폼 보드에 고정합니다.
- 입체 현미경을 교정하십시오. 적절한 초점 거리를 가진 입체 현미경을 선택하십시오. 줌/초점 버튼을 멸균된 알루미늄 호일로 덮어 외과의가 수술 중에 조정할 수 있도록 합니다. 멸균된 알루미늄 호일을 줌/초점 버튼에 놓아 외과의가 멸균 장갑을 끼고 사용할 수 있도록 했습니다.
2. 마우스 마취 및 준비
- 마우스의 무게를 측정하고 체중(이소플루란 3%)에 따라 마취합니다. 마취 깊이를 확인하기 위해 발의 손가락 간 공간을 꼬집었을 때 마우스가 반응하지 않는지 확인하십시오. 시술 내내 적절한 마취 깊이를 유지해야 합니다(1% 이소플루란
).- 수술 중 각막의 자극이나 건조를 방지하기 위해 안과 연고를 눈에 양측으로 바르십시오.
- 자동 이발기로 목과 가슴의 털을 면도하여 수술 부위를 준비합니다. 느슨한 머리카락을 제거하고 청소하십시오.
- 멸균 거즈로 덮인 보온 패드 위에 마우스를 바로 누운 자세로 놓습니다. 전체 작동 동안 마우스의 온도를 37°C로 유지하십시오. 의료용 테이프로 마우스를 고정하여 앞다리가 수평으로 외전되도록 하고 뒷다리와 꼬리가 움직이지 않도록 합니다. 적절한 개구부가 있는 멸균된 일회용 수술용 드레이프를 마우스에 놓았습니다.
3. 수술 절차
선
- 제적 진통제로 트라마돌을 주사합니다(20mg/kg, 복강내 또는 i.p.). 쇄골의 위쪽 가장자리에 가로 절개를 표시합니다. 요오도포어 소독액과 에탄올을 번갈아 가며 스크럽을 3회 반복하여 수술 부위를 소독합니다. 수술 전에 발가락 꼬집기로 마취 깊이를 확인하십시오.
- 현미경으로 작업하면서 멸균 메스를 사용하여 표시를 따라 4mm 가로 절개합니다. 필요에 따라 시술 중 절개
부위를 확대합니다.- 피하 근막을 통해 무딘 해부하고 턱하샘의 하부 경계를 식별합니다. 하악하샘을 위쪽으로 당겨 쇄골상와와 흉골을 노출시킵니다.
참고: 이 부위에 소구경 혈관이 있을 수 있습니다. 전기 소작술은 출혈을 멈추는 데 사용할 수 있습니다. - 정중선을 따라 머리에서 꼬리까지 흉골을 절개하여 부분적인 정중 흉골 절개술(~4mm)를 만듭니다. 흉골 절개술 중 흉막, 심장 및 혈관을 보호하십시오.
- 흉골설골근을 식별합니다. 침술 바늘로 만든 두 개의 작은 맞춤형 견인기로 흉골을 부드럽게 당기고 기관과 식도 위의 흉골설골 근육을 식별합니다. 이 근육을 후퇴시켜 경동맥, 내경정맥, 횡격막 신경, 미주 신경, 기관 및 식도를 노출시킵니다.
참고: 열린 기흉을 피하기 위해 흉골을 부드럽게 후퇴시킵니다. 인간과 달리 쥐의 식도는 기관 뒤가 아니라 왼쪽 기관에 인접 해 있습니다.- 왼쪽 상완 신경총을 식별합니다. 왼쪽 내경정맥의 측면 가장자리에서 근막과 지방 조직을 바깥쪽으로 당겨 상완 신경총을 노출시킵니다. 세 개의 가지가 있는 경추 또는 C5 및 C6 신경으로 구성된 상부 몸통을 찾으십시오. C7 신경으로 구성된 중간 몸통과 C8 및 흉부 또는 T1 신경으로 구성된 하부 몸통을 상부 몸통을 따라 마우스의 꼬리까지 식별합니다.
참고: 상완 신경총 표면에는 세로 혈관이 있습니다. 출혈을 예방하기 위해 전기 소작을 사용하십시오. 왼쪽 상완 신경총을 분리할 때 유미관을 보호하여 유미 누공을 피하십시오. - 왼쪽 C7 신경을 채취합니다. 중간(C7 신경)의 전방 분할과 후방 분할을 쇄골 아래 분열에서 척수 수준까지 원위부로 해부하고 신경줄에 국소 주입하여 2% 리도카인 0.1mL로 C7 신경을 차단합니다. 측면 코드 및 후방 코드와의 합류 지점에서 Vannas 스프링 가위로 C7 신경을 절제합니다. 각 분열의 길이가 비슷하도록 C7 신경을 다듬습니다.
참고: C7 신경의 전방 및 후방 분할과 상부 및 하부 몸통의 전방 및 후방 분할은 합류 전에 먼 거리를 이어지므로 절제 전에 C7 신경을 충분히 풀어야 합니다. 사실, C7 신경이 항상 두 부분으로 나뉘는 것은 아닙니다. 때로는 세 부분으로 나뉘거나 드물게 네 부분으로 나뉘기도 합니다. - 왼쪽 C6 복부판을 제거합니다. 횡격막 신경을 조심스럽게 보호하고 C6 분절 수준에서 전방 비늘근을 절단하여 C7 신경근을 노출시킵니다. 척수주위 근육을 자극하는 C7 신경의 작은 가지를 마이크로겸자로 자릅니다. C7 신경을 부드럽게 당겨 C6 복부층을 조심스럽게 절제합니다.
참고: 좌경동맥의 내측과 식도의 외측 사이에 뼈가 돌출되어 있습니다. 이 뼈 돌출부는 6번째 경추의 복부층입니다. C6 복부판 측면 가장자리의 세로근은 전방 비늘근이고 횡격막 신경은 전방 비늘근의 표면을 달립니다. - 오른쪽 C7 신경을 채취합니다. 왼쪽과 유사하게 오른쪽의 전방 비늘근을 절단하고 추간공에 가까운 오른쪽 C7 신경근을 절개합니다. 오른쪽 C7 신경을 분할 수준에서 해부합니다.
참고: 신경 아래 혈관의 손상을 방지하기 위해 오른쪽 C7 신경을 조심스럽게 절단하십시오. - 왼쪽 C7 신경을 이식합니다.
양- 쪽 척추체 옆에 있는 근육 장근을 부분적으로 제거합니다. 기관-식도와 척추체 사이의 공간을 무뚝뚝하게 분리하고 확장합니다.
- 척추 전 경로를 통해 척추체의 오른쪽에서 왼쪽으로 반접 5-0 나일론 봉합사를 보냅니다.
- 주입관으로 왼쪽 C7 신경을 연결하고 척수전 경로를 통해 신경을 오른쪽으로 안내합니다.
- 기관과 식도를 부드럽게 후퇴시키고 12-0 나일론 봉합사를 사용하여 왼쪽 C7 신경의 전방 및 후방 분할을 긴장 없이 오른쪽 C7 신경근에 연결합니다. 신경 주위에 신경외막을 4-5바늘로 봉합하여 신경을 강하게 접합시킵니다.
참고: 적절한 두께의 플라스틱 주입 튜브를 선택하는 것이 중요합니다. 관이 너무 얇으면 신경이 손상될 수 있고, 관이 너무 두꺼우면 기관과 식도가 손상될 수 있습니다. 또한 기관식도와 척추체 사이의 공간은 "V"자 모양의 공간이며 장근의 일부를 절단하면 전달 경로를 단축할 수 있습니다.
4. 상처 봉합
:
- 멸균 생리 식염수로 상처를 세척하고 멸균 거즈로 말립니다.
- 흉골을 봉합하고 5-0 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 피부를 봉합합니다.
5. 수술 후 관리
- 마우스가 마취에서 깨어날 때까지 기다립니다. 마우스를 침구 재료가 없는 깨끗한 케이지로 옮기되 따뜻한 담요로 따뜻하게 합니다. 마우스가 걸을 수 있을 때까지 관찰하십시오. 수술 후 진통제로 트라마돌(20mg/kg, i.p.)을 사용하십시오.
- 마우스를 회복 케이지에 넣고 회복될 때까지 모니터링합니다. 수술 후 쥐의 물과 식단을 회복하십시오. 수술 후 영양실조, 구부정한 자세, 주름진 털을 포함한 손상 또는 감염의 징후가 있는지 매일 마우스를 모니터링하십시오. 수술 후 2주가 지나면 봉합사를 제거해야 합니다.
참고: 연속 3일 동안 매일 상처 표면에 에리스로마이신 연고를 바릅니다. - 상처 부종과 같은 합병증이 관찰되면 즉시 해결해야 합니다.