마이크로웰 어레이에서 박테리아 콜로니의 광분해성 하이드로겔 기반 분리

초록

출처: Fattahi, N., et al. 박테리아 스크리닝, 선택 및 분리를 위한 광분해성 하이드로겔 인터페이스. J. Vis. 경험. (2021년)

이 비디오는 실리콘 마이크로웰 어레이 내에서 박테리아 콜로니를 분리하기 위해 광분해성 하이드로겔을 사용하는 방법을 보여줍니다. 박테리아 세포는 먼저 마이크로웰에 로드되고 가교 하이드로겔에 캡슐화되고 별개의 콜로니로 배양됩니다. 자외선에 노출되면 하이드로겔의 표적 분해를 통해 개별 콜로니를 선택적으로 추출할 수 있습니다.

프로토콜

1. 박테리아 균주 및 배양 프로토콜

1. 적절한 성장 배지가 보충된 한천 플레이트에 박테리아 군집을 줄무늬로 만듭니다. 본 보고서에서 Bacillus subtilis(균주 1A1135, Bacillus Genetic Stock Center)를 ATGN(0.079 M KH₂PO₄, 0.015 M(NH₄)₂SO₄, 0.6 mM MgSO₄·7H₂O, 0.06 mM CaCl₂·2H₂O, 0.0071 mM MnSO₄·H₂O, 0.125 M FeSO_4·7H₂O, 28 mM 포도당, pH: 100 μg/mL 암피실린이 보충된 ATGN 한천 플레이트에 100 μg/mL 스펙티노마이신 및 대장균(균주 25922, ATCC)이 보충된 7 ± 0.2, 15 g/L 한천) 한천 플레이트.
   참고: 하이드로겔 캡슐화 및 방출에 대한 이전 보고는 대신 A. tumefaciens C58 세포를 사용했습니다
.
2. ATGN 한천 플레이트에서 원하는 콜로니를 선택하고 하룻밤....

결과

그림 1: 마이크로웰 어레이의 설계 및 제작. (A) 마이크로웰 어레이를 제작하기 위해 표준 미세 가공 기술이 적용되었습니다. 실리콘 웨이퍼. (B) 각 기판은 깊이 20μm, 피치 30μm의 직경 10μm 웰 7 x 7 어레이로 구성되었습니다. (C) 각 어레이는 225개의 마이크로웰로 구성되었습니다. 이 그림은 Barua et a.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
황산암모늄	Fisher Chemical	A702-500	인증 ACS 과립형
고지균 1A1135	Bacillus Genetic Stock Center	1A1135
명시야 정립 현미경	Olympus Corporation	BX51
무수	Fisher Chemical	C614-500	, 4-20 메쉬
DOWSIL 184 실리콘 엘라스토머 베이스	Dow Silicones Corporation		보관 온도: -30-60 °C
DOWSIL 184 실리콘 엘라스토머 경화제	Dow Silicones Corporation		보관 온도: < 32C
EPOCH2 마이크로플레이트 분광 광도계	BioTek Instruments	EPOCH2
대장균 ATCC 25922	Thermo Fisher Scientific	R19020
에탄올, 무수	Fisher Chemical	459844
Fisherfinest 프리미엄 현미경 슬라이드 일반	Fisher Scientific	12-544-4
과산화수소 용액	Sigma-Aldrich	216763-500ML	제, H2O 이
소프로판올	Sigma-Aldrich	190764
산마그네슘, 7-수화물	Macron Fine Chemicals	6066-04	Avantor Performance Materials, Inc.
메탄올	시그마-알드리치	179337-4L	ACS 시약, > 99.8%
질소, 압축	Matheson	UN1066
펜타에리트리톨 테트라(메르캅토에틸) 폴리옥시에틸렌(4 arm-PEG)	NOF America Corporation	PTE-100SH	Sunbright-PTE-100SH
인산염 완충 식염수(PBS), 10X	VWR Amresco 생명 과학	K813-500ML	15 사이 저장 °C–30 °C
프리미엄 현미경 슬라이드	Fisher Scientific	12-544-4	25 x 75 x 1 mm
염화나트륨	Sigma Life Science	S5886-500G	생물 시약, 세포 배양에 적합
수산화나트륨	Sigma-Aldrich	S8045-500G	BioXtra, > 98%, 펠릿(무수)
인산나트륨 일염기성 이수화물	Sigma-Aldrich	71505-250G	BioUltra, 분자 생물학용, > 99.0% (T)
스테인레스 스틸 두께 게이지	정밀 브랜드 제품	77739

염화칼슘, 건조기 펠렛용 억제 황 함유