투과전자현미경을 이용한 시아노박테리아 세포외소포의 시각화

초록

출처: Biller, SJ, et al. 시아노박테리아 세포외 소포의 분리 및 특성화. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 음성 염색을 통해 투과 전자 현미경을 위한 시아노박테리아 세포외 소포를 준비하여 구조 및 비교 분석을 위해 소포 형태, 크기 및 순도를 고해상도로 시각화하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 분리된 소포의 특성화

음성

1. 염색 투과 전자 현미경 ( 재료 표 참조) (TEM - 투과 전자 현미경, 입자 크기, 구조, 순도)을 수행합니다.
   1. 이미지 품질을 향상시키려면 제조업체의 지침에 따라 글로우 방전 시스템을 사용하여 이전 코팅된 TEM 그리드의 표면을 글로우 방전합니다( 재료 표 참조).
   2. 소포 샘플의 ~5 μL를 조심스럽게 적용하고 5분 동안 그대로 두십시오.
      >참고: 소포 농도가 >10^{9 mL-1}인 샘플은 일반적으로 최상의 결과를 제공합니다. 더 희석된 샘플은 이미지당 소포가 거의 없습니다.
   3. 그리드의 가장자리를 깨끗한 여과지에 대고 샘플을 제거합니다.
   4. 플라스틱 필름으로 덮인 평평한 표면에 20-50μL의 2% 우라닐 아세테이트( 재료 표 참조)를 피펫팅하고 그 위에 그리드를 2분 동안 떠 놓습니다.
   5. 여과지를 사용하여 우라닐 아세테이트를 제거하고 초순수 한 방울에 잠시 띄워 씻습니다. 물 세척을 두 번째로 반복합니다.
      참고: 최종 건식 그리드는 1.1.5단계 후에 시각화할 준비가 되었습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2% 우라닐 아세테이트 용액	Electron Microscopy Sciences	22400-2	Negative staining - TEM
Carbon Support Film 200 Mesh, copper. CF200-Cu	전자 현미경 Sciences	71150	투과 전자 현미경(TEM) 그리드
easysiGlow 글로우 방전 세척 시스템	Ted Pella	91000	상업용 TEM 그리드 글로우 방전 장치
Milli-Q 기준 정수 시스템	Merck	Z00QSV0WW	유형 I 초순수 등급 물을 얻기 위한 정수 시스템
투과 전자 현미경	JEOL	JEM-1400	또는 유사한 현미경