생체모방 비드를 사용한 박테리아-숙주 세포 상호 작용 평가

초록

출처: Stones, DH, et al. 박테리아-숙주 상호 작용을 특성화하기 위한 생체모방 재료. J. Vis. 경험. (2015년)

이 비디오는 경쟁 조건에서 숙주 상피 세포에 대한 박테리아 부착을 정량화하기 위해 박테리아 유사체 비드를 사용하는 방법을 보여줍니다. 세포를 처리하고, 용해하고, 콜로니 형성 단위를 측정하기 위해 연속 희석액을 도금하는 단계에 대해 간략하게 설명합니다.

프로토콜

1. 박테리아 부착 측정
   1. 지정된 시점(예: 감염 후 1시간)에 세포층에서 배지를 제거합니다.
   멸
   2. 균되고 예열된 인산염 완충 식염수(PBS)(각각 1ml PBS를 최소 3-4회 세척)로 세포층을 철저히 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거합니다.
   3. 웰당 PBS에 멸균 1% v/v Triton X-100 용액 1ml를 첨가하여 숙주 세포를 용해합니다. 플레이트를 37°C에서 5분 동안 배양합니다.
   4. 각 웰의 내용물을 별도의 1.5ml 튜브로 옮기기 전에 각 샘플을 위아래로 여러 번 피펫팅합니다. 멸균 PBS에 샘플의 10배 연속 희석액을 준비합니다(예: 샘플 100ml와 PBS 900ml 사용).
   5. 각 샘플의 100μl를 해양 Luria-Bertani(MLB) 한천에 도금하고 세포 스프레더를 사용하여 확산합니다. 박테리아 균주 및 시점에 따라 플레이트할 희석액을 최적화합니다.
      참고: 설명된 실험 설정의 경우 10⁵배 또는 10⁶배 희석액으로 적절한 수의 콜로니 형성 단위(CFU)를 얻을 수 있습니다.
   6. 플레이트를 37°C O/N에서 배양하고 콜로니 계수로 박테리아를 열거합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약
카르복실레이트 변성 폴리스티렌 비드	시그마	CLB9	유해; 다양한 대체 입자 크기 및 색상을 사용할 수
있습니다.Dulbecco's Modified Eagle's Medium - 고포도당 - 포도당 및 중탄산나트륨 4500mg/L 함유, L-글루타민, 피루브산나트륨 및 페놀 레드 없음, 액체, 멸균 여과, 세포 배양에 적합	감염 실험용	Sigma	D1145
양 숙주 세포 유지용	DMEM	Sigma	D6429
태아 혈청, 열 비활성화	Sigma	F9665	조직 배양 배지 용 보충
페니실린-스트렙토마이신 - 안정화 용액, 페니실린 10,000 단위 및 스트렙토마이신 10mg/mL, 멸균 여과, 바이오시약, 세포 배양에 적합	조직 배양 배지용	Sigma	F9665
PBS	Sigma	D8537
플라스틱 제품
24웰 플레이트	Greiner	662160
장비
조직 배양 시설
다중 채널 피펫

배 소제 보충제