이 비디오는 액체 및 반고체 배지를 모두 사용하여 미호기성 조건에서 마그네토스피릴룸 박테리아를 배양하는 방법을 보여줍니다. 이는 산소-무산소 계면에서 눈에 보이는 박테리아 밴드의 형성과 산소가 고갈됨에 따라 상향 이동을 강조합니다. 이 비디오는 또한 자기장에 대한 반응으로 방향성 수영을 관찰하여 자기 이동 행동을 평가하는 방법을 보여줍니다.
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방법 논문
마그네토스피릴룸 박테리아 성장 및 자기 이동 거동 평가
784 조회수
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2025년 8월 29일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 자기주성 박테리아(MTB)의 접종참고
: AMB-1, MS-1 및 MSR-1 균주의 배양은 상업적으로 얻을 수 있습니다(재료 표).
주의 : 분젠 버너의 화염 아래에서 멸균 상태에서 다음 단계를 모두 수행하십시오.
- 액체 배지에 균주 MSR-1, AMB-1 및 MS-1 접종
- 빈 125mL 혈청병을 부틸 고무 마개와 알루미늄 압착 씰로 밀봉합니다. 마개를 통해 병에 두 개의 바늘을 삽입하고 그 중 하나에 주사기를 연결합니다. N2 스테이션에 사용되는 것과 동일한 유형의 튜브를 통해 주사기를 O2 실린더에 연결합니다.
- O2가 약 30분 동안 병을 통해 흐르도록 하여 병의 모든 공기가 O2로 대체되도록 합니다. 두 바늘을 모두 제거하여 병에 약간의 과압이 가해지도록 한 다음 오토클레이브합니다. 사용하기 전에 병을 실온으로 식히십시오.
참고: 시간을 절약하려면 배지 준비 중에 1.1.1 및 1.1.2단계를 수행하고 배지 또는 원액과 함께 병을 오토클레이브합니다. - 신선한 미디엄 병과 O2 병의 마개 상단을 그 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 바르고 분젠 버너의 불꽃에 통과 시켜 멸균합니다.
- 멸균 주사기와 바늘을 사용하여 O2 병에서 O2 1mL를 추출하고 신선한 배지 병으로 옮깁니다. 주사기에 공기가 들어가지 않도록 이 단계에서 바늘이 주사기에 단단히 고정되었는지 확인하십시오.
- 유리병에서 성장한 다른 배양물의 접종물을 사용하는 경우 신선한 배지 병과 오래된 배양 병의 마개 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 바르고 분젠 버너의 불꽃을 통과시켜 멸균합니다. 냉동 배양 튜브의 접종물을 사용하는 경우 분젠 버너의 화염 아래 튜브를 밀봉한 상태에서 실온으로 예열하십시오.
- 유리병에서 성장한 다른 배양액의 접종물을 사용하는 경우 오래된 배양액 1mL를 신선한 배지에 접종합니다. 냉동 스톡에서 접종액을 사용하는 경우 냉동 공정에 사용되는 글리세롤 또는 디메틸 설폭사이드(DMSO)를 희석하기 위해 0.1mL만 접종하십시오. 두 경우 모두 멸균 바늘과 멸균 주사기를 사용하십시오.
- 배양액을 32°C에서 배양하고 4-7일 후에 신선한 배지에 접종합니다.
- O2 구배 반고체 배지에 MSR-1 접종
- 신선한 배지 튜브가 분홍색에서 무색 인터페이스로 구체화된 잘 정의된 산소-무산소 인터페이스(OAI)를 표시하는지 확인합니다.
- 접종물이 다른 O2 농도 구배 반고체 배양에서 나오는 경우, 박테리아에 의해 형성된 밴드에 멸균 피펫 팁을 놓고 배양액 50μL를 피펫팅하여 박테리아를 수확합니다. 이러한 박테리아를 신선한 배지(분홍색/무색 계면)의 OAI에 천천히 접종하여 계면을 방해하지 않도록 합니다. 접종물이 냉동 배양에서 나오는 경우 대신 100μL의 접종물을 사용하여 동일한 방식으로 진행합니다.
- 튜브를 밀봉하고 박테리아가 25°C에서 30°C 사이에서 자라도록 합니다. 박테리아 밴드가 배지 표면에 도달하기 전에 동일한 절차를 사용하여 신선한 배지로 옮깁니다.
2. 박테리아 관찰
- 배양병의 마개 위에 70% 에탄올 용액을 바르고 분젠 버너의 불꽃에 통과시켜 살균합니다. 반고체 매체의 경우 분젠 버너의 화염 아래에서 튜브를 엽니다. 멸균 바늘과 멸균 주사기를 사용하여 박테리아를 추출하십시오.
- 행잉 드롭 방법8을 사용하여 박테리아가 자성과 운동성을 모두 갖도록 합니다.
참고: 위상차 현미경은 훌륭한 결과를 제공하지만 필수는 아닙니다. 10X에서 60X 범위의 배율이 적합합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| AMB-1 | American Type Culture Collection (ATCC) | ATCC 700264 | |
| MS-1 | ATCC ATCC | 31632 | |
| MSR-1 | Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ) | DSM 6361 | |
| L-시스테인.HCl.H₂O | 시그마-알드리치 | C7880-100G | |
| 1.0mL 주사기 | 피셔 사이언티픽 | B309659 | |
| 25G x 1 바늘 | BD | 305125 | |
| 125mL 혈청 병 | 튼 | 223748 | |
| 20mm 알루미늄 씰 | 휘튼 | 224223-01 | |
| 20mm EZ 크림퍼 | 휘튼 | W225303 | |
| 부틸 고무 마개 | Bellco Glass, Inc. | 2048-11800 | |
| 헝가테 튜브 | 켐글라스(VWR) | CLS-4208-01 | |
| 격막 스토퍼, 13mm, 헝가테 | 벨코 유리, Inc. | 2047-11600 | |
| 유리 배양 튜브 | 코닝(VWR) | 9826-16X |
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