집중광 조명을 이용한 사상체 시아노박테리아의 광주성 분석

초록

출처: Weber, N. et. al., 필라멘트 시아노박테리움 포르미디움 라쿠나의 자연 변형, 단백질 발현 및 냉동 보존. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 사상체 시아노박테리아의 광주성을 연구하기 위한 집중된 LED 기반 분석을 보여줍니다. 박테리아는 광원을 향해 이동하여 조명 중심에 조밀한 축적물을 형성하며, 이는 캡처된 이미지의 픽셀 강도 분석을 통해 시각화되고 정량화됩니다.

프로토콜

1. 광주성 분석
   1. 광주성 실험의 경우 선택한 5mm LED가 장착되어 아래에서 위로 20mm² 의 영역을 조사하는 발광 다이오드(LED) 홀더(여기서는 3D 프린터 포함)를 준비합니다(그림 1). 필요한 경우 많은 LED 홀더를 병렬로 사용하여 저항과 전위차계를 통해 각 LED를 조정 가능한 전원 공급 장치에 전기적으로 연결합니다. 실험에 따라 LED 강도를 측정하고 조정합니다. 전체 설정이 어두운 방이나 밀폐되고 어두운 용기에 있는지 확인하십시오.
   2. Phormidium lacuna를 함유한 배지 8mL를 6cm 페트리 접시에 넣습니다. LED의 광도를 조정합니다. 뚜껑으로 페트리 접시를 닫고 LED가 페트리 접시 중앙에 오도록 LED 홀더 위에 올려 놓습니다.
   3. 원하는 기간(일반적으로 2일)이 지나면 스마트폰 카메라로 조명 처리 위치를 직접 겨냥하여 페트리 접시의 이미지를 캡처합니다. 표본 조사에는 백색 LED 패널을 사용하십시오. 카메라의 수동 설정을 사용하십시오. 빛의 반사를 피하십시오. 항상 카메라 렌즈와 시편 사이의 거리가 같도록 조정하십시오. 노출 설정이 ImageJ를 사용하여 나중에 분석하기에 적합한 이미지를 제공하는지 확인하....

결과

그림 1: 광주성 실험. 왼쪽: 조정 가능한 전원 공급 장치에 연결된 4개의 빨간색 LED가 있는 LED 홀더. 각 LED 위에는 8mL의 Phormidium lacuna 배양액이 들어 있는 6cm 페트리 접시가 있습니다. 오른쪽: 빨간색 LED(15 μmol ^{m-2 s-1})에서 2일 후 P. lacuna가 있는 페트리 접시. 약어: LED = 발광 다이오드.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
페트리 접시 폴리스티롤, 60mm x 15mm	머 크	P5481-500EA
광도계 나노드롭 ND-1000	Peqlab 생명공학
광도계 Uvikon XS	Goebel Instrumentelle Analytik GmbH
피펫맨 10-100 μL	길슨	참조 : FA10004M
소프트웨어, URL
이미지J		이미징 처리용 소프트웨어(픽셀 강도, 원 직경)
배양 배지
f/2 - 액체 매체	인공 해수, 0.1%(v/v) 미량 원소 용액, 0.05%(v/v) 비타민 용액, 0.88 mM 질산나트륨, 36 μM 인산나트륨