황화수소 생성 박테리아 검출을 위한 민감한 시각적 방법

초록

출처: Zhu, W., &; Chu, W. 황화수소 생성 박테리아 검출을 위한 민감한 시각적 방법. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 황화수소 생성 박테리아를 신속하게 검출하기 위한 민감한 시각적 방법을 보여줍니다. 노란색에서 검은색으로 색상이 변하는 것은 황화비스무트 형성을 통한 박테리아 활동을 나타냅니다.

프로토콜

1. 박테리아 균주

메모: 이 실험에는 살모넬라 파라티피스 A, 살모넬라 파라티피 B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, 황색포도상구균, 녹농균 PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris 및 Klebsiella pneumoniae를 포함한 9개의 표준 균주가 사용되었습니다. 살모넬라 파라티피스 A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa 및 Proteus vuigaris는 H₂S를 생산할 수 있습니다.

1. 세균 배양의 준비
   1. 살모넬라 파라티피 A, 살모넬라 파라티피 B, 장구균 파칼리스, 황색포도상구균, 녹농균 PAO1, 에어로모나스 하이드로필라 YJ-1 및 폐렴균의 박테리아 콜로니 1개를 루리아-베르타니(LB) 한천 플레이트에서 LB 배지 100mL로 옮기고 박테리아 농도가 약 1 x 10⁹ cells/mL가 될 때까지 37°C에서 12-16시간 동안 배양합니다(OD₆₀₀ = 1)을 사용합니다.
   2. 트립티카제 대두 국물(TSB) 한천 플레이트에서 Fusobacterium nucleatum 과 Proteus vuigaris 의 1개의 박테리아 콜로니를 100mL의 TSB 배지로 옮기고 박테리아 농도가 약 1 x 10⁹ cells/mL가 될 때까지 37°C에서 24시간 동안 혐기적으로 배양합니다(OD₆₀₀ = 1로 표시).

2. H₂S 검출 분석

1. 황화수소 생산 시험
   1. 100μL의 박테리아 배양액과 100μL의 새로 준비된 비스무트 용액(pH 8.0; 염화비스무트(III) 10mM, 트리에탄올아민-HCl 0.4M, 20mM 피리독살 5-인산염 일수화물, 20mM EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 및 40mM L-시스테인)을 96웰 마이크로타이터 플레이트에 혼합하고 37°C에서 20분 동안 배양합니다. 각 박테리아 균주에 대해 세 번씩 분석을 수행합니다.
   2. 20분 후 색상 변화를 확인합니다. 용액의 색상이 연한 노란색에서 검은색으로 변하면 박테리아가 H₂S를 생성할 수 있음을 나타냅니다. 이 측정을 3회 반복합니다.
2. 방법의 민감도
   1. BS(황화비스무트) 용액과 혼합된 2mM, 1mM, 0.8mM, 0.6mM, 0.4mM, 0.2mM, 0.1mM 및 0mM의 다양한 농도의 황화수소나트륨(NaHS)을 사용하여 분석법의 민감도를 결정합니다.
   2. 검은색 BS 침전물의 형성을 관찰하여 ^HS−/S²⁻ 의 존재를 결정합니다. 색상 생성 없음(-)에서 가장 어두운 검은색 생성(++++++)까지 시각적 척도를 사용하여 우물의 색상을 점수화합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
염화비스무트(III)	상하이 Macklin 생화학 Co., Ltd	7787-60-2
EDTA	난징 화학 시약 Co., Ltd	60-00-4
Fusobacterium nucleatum	ATCC	25586
L-시스테인	암레스코	52-90-4
트리에탄올아민-HCl	상하이 알라딘 생화학 기술 Co., Ltd.	637-39-8
황화수소나트륨
피펫