혐기성 박테리아에 의한 쥐 질 집락화 모델링

초록

출처: Morrill, SR, et al. 혐기성 성장 박테리아에 의한 쥐 질 집락화 모델. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 항생제 내성 혐기성 박테리아를 사용하여 마우스의 질 집락화를 모델링하기 위한 프로토콜을 보여줍니다. 상피 감수성을 증가시키기 위한 호르몬 치료로 시작하여 혐기성 조건에서 질 접종 및 동시 접종이 이어집니다. 이 절차는 박테리아 집락화 및 생물막 형성을 평가하기 위한 접종 후 샘플링 및 배양으로 마무리됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 접종물의 준비

메모: 이 섹션에는 혐기성 성장 스트렙토마이신 내성 Gardnerella vaginalis JCP8151B-SmR에서 접종을 준비하기 위한 일반적인 단계가 포함되어 있습니다. 이 섹션의 모든 단계는 혐기성 챔버에서 수행되어야 합니다.

1. 준비된 뉴욕시 국물 III(NYCIII), 한천 및 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한 모든 시약을 혐기성 챔버로 순환시켜 사용하기 전에 최소 24시간 동안 평형을 유지합니다.
   메모: 여기에서는 5% 수소 가스 혼합물로 평형을 이룬 비닐 혐기성 챔버를 사용했습니다. 내부 산소 농도는 일반적으로 0ppm이지만 재료를 챔버로 순환시킬 때 낮은 수준의 일시적 증가(10-25ppm)가 있을 수 있습니다.
2. 질 접종 2일 전, 냉동 글리세롤 스톡에서 혐기성 챔버의 NYC III 한천 플레이트에 Gardnerella 를 줄무늬로 제거합니다. 드라이아이스로 채워진 작은 용기(예: 빈 피펫 팁 상자)를 사용하여 챔버 안팎으로 운반하는 동안 글리세롤 스톡을 얼린 상태로 유지하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
β-에스트라디올 17-발레레이트	시그마	E1631	마우스의 에스트로겐화
PBS 1개	어부	MT21040CM	질 세척, G. vaginlalis 접종물 준비, 조직 수집 및 균질화
혐기성 챔버	은근한	7200000	혐기성 박테리아의 성장
박토 한천	어부	DF0140074	G. vaginalis, F. nucleatum 및 P. bivia 한천 플레이트
포도당	시그마	지7528	G. vaginalis 성장을 위한 NYCIII 배지
헴스	셀그로	25-060-CL	G. vaginalis 성장을 위한 NYCIII 배지
말 세럼	지혈제	SHS500	G. vaginalis 성장을 위한 NYCIII 배지
수소 가스 혼합물(수소 5%, CO₂ 10%, 질소 85%)	매서슨		혐기성 챔버용 가스
Milli-Q 정수기	밀리포어	IQ-7000	미디어 제작 및 균질화용
나크롬	시그마	S3014 시리즈	G. vaginalis 성장을 위한 NYCIII 배지
질소 가스	에어가스		혐기성 챔버용 가스
P-200 필터 팁	ISC 바이오	원-1237-200	질 세척 및 박테리아 접종
참기름	어부	ICN15662191	마우스의 에스트로겐화
분광 광도계	바이오크롬	80-3000-45	박테리아 OD 측정₆₀₀
스트렙토마이신	깁코	11860038	한천 배지에 첨가하여 선택적 플레이트 만들기
효모 추출물	어부	DF0127-17-9	G. vaginalis 성장을 위한 NYCIII 배지