토마토의 박테리아 내성 스크리닝을 위한 묘목 홍수 분석

초록

출처: Hassan, JA, et al. Pseudomonas syringae pv에 대한 내성의 고처리량 식별. 묘목 홍수 분석을 사용한 토마토의 토마토. J. Vis. 경험. (2020).

이 비디오는 박테리아 현탁액을 접종한 10일 된 묘목을 사용하여 다양한 토마토 균주에서 박테리아 내성을 스크리닝하는 방법을 보여줍니다. 박테리아가 기공을 통해 침입하고, 식물 면역을 억제하기 위해 이펙터 단백질을 전달하는 방법, 감수성 균주와 내성 균주 간에 식물 반응이 어떻게 다른지 설명합니다. 결과는 눈에 보이는 성장 차이를 관찰하여 평가되며, 저항성 식물은 건강하게 유지되고 취약한 식물은 조직 손상을 보입니다.

프로토콜

1. 토마토 묘목 홍수 방법

1. 10일 된 묘목이 담긴 접시를 성장실에서 꺼내 생물안전 캐비닛에 넣어 침수에 대비할 수 있도록 합니다.
2. 두 개의 플레이트에서 수술용 테이프를 제거합니다.
3. 타이머를 3분으로 설정합니다. P. syringae pv의 최종 접종물 6mL를 측정합니다. 토마토 (Pst)(Pst19 OD₆₀₀ = 0.0075 또는 PstDC3000 OD₆₀₀ = 0.005)를 10일 된 묘목과 함께 각 플레이트에 6mL의 접종물을 옮깁니다.
4. 멸균 피펫 팁으로 묘목을 접종물 안으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 타이머를 시작합니다.
5. 양손에 접시를 하나씩 잡습니다. 접시 앞면을 아래로 기울여 접종물을 축적하고 주로 묘목의 자엽과 잎을 담그십시오.
6. 좌우로 5-7회 휘젓은 다음 플레이트를 다시 기울여 뿌리와 전체 플레이트를 덮습니다.
7. 접시를 다시 아래로 기울여 자엽과 잎을 잠기고 총 3분 동안 반복합니다.
8. 접종물을 접시에서 붓고 접시를 평평한 표면에 놓은 다음 잔여 접종물을 두 번째로 붓습니다.
9. 수술용 테이프로 플레이트를 다시 감싸고 나머지 플레이트에 대해 1.2-1.8단계를 반복합니다.
10. 모든 플레이트가 범람한 후 성장 챔버에서 플레이트를 다시 배양합니다.

PstDC3000의 경우 7-10일 후 또는 Pst19의 경우 10-14일 후 표현형.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
생물안전 캐비닛, 클래스 II 유형 A2
브랜드 일회용 플라스틱 큐벳, 폴리스티렌	VWR 인터내셔널	47744-642
셔닐 크래프트 플랫 우드 이쑤시개	VWR 인터내셔널	500029-808
유리 알코올 버너 심지	피셔 사이언티픽	S41898A / 아니오. W-125
유리 알코올 버너	피셔 사이언티픽	S41898 / 번호 BO125
글리세롤 ACS 시약	VWR 인터내셔널	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ 섬세한 작업 와이퍼	피셔 사이언티픽	06-666-A
염화마그네슘, ACS 등급	VWR 인터내셔널	97061-356
황산마그네슘 칠수화물, ACS 등급	VWR 인터내셔널	97062-130
미세 원심분리기 튜브, 1.5 mL
미세 원심분리기 튜브, 2.2 mL
Murashige &; Skoog, 기저염	케이슨 연구소, Inc.	MSP01-50LT
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH 피펫 20-200uL	레인인	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH 피펫 2-20uL	레인인	L8-20XLS
폴리스티렌 100mm x 25mm 멸균 페트리 접시	VWR 인터내셔널	89107-632
폴리스티렌 150mm x 15mm 멸균 페트리 접시	피셔 사이언티픽	FB08-757-14
폴리스티렌 150x15mm 멸균 페트리 접시	피셔 사이언티픽	08-757-148
팁 LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	레인인	17005091
팁 LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	레인인	17005093