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생존 가능한 Clostridioides difficile을 복구하기 위한 유충 제브라피쉬 장 해부
- 박테리아 부하를 분석하기 위해 유충으로부터 위장관을 분리합니다. 제브라피쉬 유충을 0.4% 트리카인으로 안락사시키는 것으로 시작하십시오.
- 멸균 1x PBS(인산염 완충 식염수)로 제브라피시를 잠시 헹구고 신선한 아가로스 플레이트에 옮깁니다.
- 제브라피쉬 해부
- 제브라피쉬 유충의 등줄기에 머리 가까이에 바늘을 삽입하여 제브라피시를 고정시킵니다. 란셋으로 아가미 뒤의 머리를 제거합니다.
- 두 번째 바늘을 등쪽 몸통 중앙에 삽입합니다. 제브라피쉬의 복부에 세 번째 바늘을 삽입하고 장을 체강 밖으로 당깁니다.
메모: 온전한 장을 분리하려면 각별한 주의가 필요합니다. 그렇게 하기 어려운 경우 나머지 장과 나머지 내부 장기를 분리하기 위해 추가로 당깁니다. - 미세 주입 바늘을 사용하여 10-15개의 장을 200 μL 멸균 1x PBS가 들어 있는 1.5 mL 튜브로 옮깁니다.
- 유봉으로 장을 균질화하여 조직을 파괴하고 균질화를 준비합니다. 유봉이 튜브 바닥에 도달하여 모든 장을 완전히 파괴하는지 확인하십시오.
- 혐기성 챔버에서 타우로콜레이트(TCA, C. difficile 포자의 발아제)를 포함하거나 포함하지 않는 D-사이클로세린 및 cefoxitin을 포함하는 C. difficile 사육 배지에서 균질산물을 배양합니다.
- 플레이트를 37°C에서 48시간 동안 혐기적으로 배양합니다.