출처: Ayivi, R. et al., 유산균의 배양, 성장 및 생존력: 품질 관리 관점. J. Vis. 경험. (2022년)
이 비디오는 냉동 글리세롤 스톡에서 저온 스트레스를 받은 유산균을 회수하고, 혐기성 배양을 통해 박테리아 생존력을 회복하고, 배양 확장을 위해 활성 콜로니를 분리하는 방법을 보여줍니다.
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방법 논문
유산균의 부활과 성장
2.4K 조회수
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2025년 9월 26일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. 유산균(LAB) 배양의 활성화 및 품질 관리를 위한 프로토콜
- 준비된 LAB 균주의 글리세롤 스톡(2mL 원심분리기 튜브)을 -80°C 초저온 냉동고에서 꺼내 사용하기 전에 해동하지 마십시오.
- 원심분리기 튜브의 입구를 70% 알코올로 청소 및 소독하고 사용하기 전에 부드럽게 소용돌이치십시오.
- 원심분리기 튜브에서 약 250μL(0.25mL)의 스톡 LAB 배양액을 신선한 2mL MRS(deMan, Rogosa 및 Sharpe 배지) 시험관에 피펫팅합니다.
- 부드럽게 소용돌이치고, 시험관을 파라필름화하고, 42°C에서 12-16시간 동안 밤새 혐기적으로 배양합니다.
- 2mL MRS 시험관에서 하룻밤 성장된 배양액 약 500μL(0.5mL)를 신선한 7mL MRS 시험관에 넣고 소용돌이치고, 42°C에서 12-16시간 동안 혐기적으로 배양합니다.
- UV-가시광선 분광 광도계로 610nm에서 배양물의 광학 밀도(OD) 또는 성장을 측정하고 0.7에서 0.9 사이의 허용 가능한 결과를 기록하여 미생물 성장을 평가합니다.
- 7mL MRS 튜브에서 하룻밤 배양액을 MRS 및 MRCM-PYR(변형된 강화 클로스트리디움 배지-피루베이트) 한천 플레이트에 줄무늬로 만들고 42°C에서 72시간 동안 혐기적으로 배양합니....
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아닐린 블루 | 써모 사이언티픽 | R21526 | 25 그램 |
| 쇠고기 추출물 | 연구 제품 국제 | 50-197-7509 | 500 그램 |
| 효모 추출물 | 피셔 사이언티픽 | BP1422-500 | 500 그램 |
| 염화칼슘 이수화물 | 피셔 사이언티픽 | C79-500 | 500 그램 |
| 무수 포도당 | 피셔 사이언티픽 | BP350500 | 500 그램 |
| D-과당 | 아크로스 오가닉스 | AC161355000 | 500 그램 |
| Difco 한천 분말 | 디프코 | DF0812-07-1 | 2kg |
| TPY 한천 | 디프코 | 211921 | 500 그램 |
| Eppendorf 미세 원심분리기 튜브(Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock) | 피셔 사이언티픽 | 05-402-12 | 2 밀리리터 |
| 글리세롤 | 써모 사이언티픽 | PI17904 | 500 밀리리터 |
| 적외선 CO₂ 인큐베이터 | 포마 사이언티픽 | ||
| 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스 | 미국 유형 문화 컬렉션(ATCC) | ATCC 11842 | |
| 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스 | 불가리아 | 에스9 | |
| 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스 | 불가리아 | LB6 | |
| 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스 | 식품 미생물학 및 생명 공학 연구소(NCATSU) | 갈까마귀 | |
| 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스 | 식품 미생물학 및 생명 공학 연구소(NCATSU) | E22 | |
| 락토바실러스 루테리 | Biogai, Raleigh / 식품 미생물학 및 생명 공학 연구소 (NCATSU) | RD2 | |
| L-시스테인 염산염 일수화물 | 시그마-알드리치 | C6852-25G | 25 그램 |
| 맥아당 일수화물 | 피셔 사이언티픽 | M75-100 | 100g |
| MRS 국물 | 네오젠 | 50-201-5691 | 5kg |
| 펩톤 3호 | 하흐 | 50-199-6719 | 500 그램 |
| 인산이염기성 칼륨(K₂HPO₄) | 연구 제품 국제 | 50-712-761 | 500 그램 |
| 아세테이트 나트륨 삼수화물 | 피셔 사이언티픽 | S220-1 | 1kg |
| 소금 | 피셔 사이언티픽 | BP358-1 | 1kg |
| 피루브산나트륨 | 피셔 사이언티픽 | BP356-100 | 100g |
| 고무 라이닝 스크류 캡이 있는 시험관 | 피셔 사이언티픽 | FB70125150 | 25 x 150 밀리미터 |
| 트윈 80 | 피셔 사이언티픽 | T164-500 | 500 밀리리터 |
| 초저온 냉동고 | 너무 낮음 | ||
| 우라실 | 아크로스 오가닉스 | AC157301000 | 100g |
| UV- 가시광선 분광 광도계 | 써모 피셔 사이언티픽 | 진화 201 | |
| 소용돌이 지니 2 | 피셔 사이언티픽 | ||
| 효모 추출물 | 피셔 사이언티픽 | BP1422-500 | 500 그램 |
| 에탄올 | 피셔 사이언티픽 | T08204K7 | 4리터 |
| 염산(6N(인증), 피셔케미칼) | 피셔 사이언티픽 | SA56-500 | 500 밀리리터 |
