항생제 약물 내성을 연구하기 위한 미세유체 칩의 박테리아 성장

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초록

이 비디오는 미세유체 칩을 사용하여 트리메토프림 항생제 스트레스 하에서 야생형 및 트리메토프림 내성 대장균 균주의 성장과 형태를 시각화하고 비교하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 온칩 성장 실험

미세유체 장치에 적재하기 전에 탈이온수로 1시간 동안 세척하고 M9 배지로 1시간 동안 세척하십시오.
매일 냉동된 샘플을 실온에서 5분 동안 해동하고 새 시험관에 신선한 M9 배지를 접종합니다. 샘플을 37°C의 셰이커 인큐베이터에 밤새 넣습니다.
미생물 샘플을 M9 배지로 10배 희석하고 미생물 샘플 용기를 5psi로 가압하여 미세유체 장치에 로드합니다. 그런 다음 약물 배지 용기를 5psi로 가압하여 트리메토프림(TMP) 약물 배지를 칩에 로드합니다. 미세유체 칩의 두 챔버 사이의 미세 기계 밸브를 15분 동안 작동시켜 미생물과 약물 사이의 혼합을 실행합니다.
도립 현미경에 장착된 현미경 인큐베이터에 미세유체 칩을 넣습니다. 도립 현미경에 장착된 CCD 카메라를 사용하여 8시간 동안 매시간 성장 챔버에서 세포 이미지를 획득합니다.
사용자 지정 프로그램 스크립트를 사용하여 셀 이미지 데이터에 대한 임계값 알고리즘을 통해 셀 번호를 계산합니다. 세포 수 데이터는 일반적으로 3개의 미세유체 챔버에 걸쳐 평균화됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호	댓글
도립 현미경	라이카 마이크로시스템즈	라이카 DMI-LED	미세유체 측정에 사용 X40 대물렌즈 NA=0.55 사용
현미경 인큐베이터	라이브 셀 기기	CU-109	미세유체 측정에 사용
솔레노이드 밸브	뉴마다인	S10MM-31-12-3	상시 개방 1.3와트 12Vdc
USB 인터페이스 카드	취미 공학	USBIO24-R 디지털 I/O 모듈	미세유체 측정용
공기 압축기	로커 사이언티픽	로커 440	미세유체용 압력 소스 최대 압력 80 psi
1/8" 미늘에 대한 수 루어 잠금 피팅	ValuePlastics.com	MTLL230-1	미세유체 제어에 사용
1/8" 미늘 - 10-32 스레드 포트	ValuePlastics.com	나-1	미세유체 제어에 사용
암 루어 잠금 피팅 - 10-32 나사 포트	ValuePlastics.com	KFTL-1	미세유체 제어에 사용
NPN 달링턴 트랜지스터 500mA, 40V(2N6427)	DigiKey.com	2N6427GOS-ND	미세유체 제어에 사용
10kOhm, 탄소 필름 저항기, 0.25W	DigiKey.com	P10KBACT-ND	미세유체 제어에 사용
탄탈륨 커패시터, 10uF, 25V, 10%	DigiKey.com	478-1841-ND	미세유체 제어에 사용
Andor CCD 카메라	안도르	자일라 4.2 플러스 SCMOS	미세유체 온 칩 이미징에 사용
트리메토프림	시그마
Difco M9 미니멀 솔트 5x	BD		보통

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