Sporosarcina pasteurii에 의한 미생물학적으로 유도된 방해석 침전

초록

출처: Bhaduri, S., et al., Sporosarcina pasteurii에 의해 매개된 미생물학적으로 유도된 방해석 침전. J. Vis. Exp. (2016년)

이 비디오는 우레아와 염화칼슘으로 Sporosarcina pasteurii 를 농축하여 우레아제 활성을 유발하여 미생물학적으로 유도된 방해석 침전(MICP)을 통해 눈에 보이는 방해석 결정을 형성하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 강수량을 가속화하기 위한 영양소 농축 프로토콜

1. 준비된 배양액(세포 + 배지) 9ml를 각각 10ml 부피의 여러 개의 멸균된 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
2. 신선한 배지에서 다음 농도의 4가지 성분으로 구성된 외부 농축의 100ml 원액을 준비합니다: 요소: 2g/L, 염화암모늄: 1g/L, 중탄산나트륨: 212mg/L, 염화칼슘: 280mg/L. 분석 저울을 사용하여 모든 성분을 주의 깊게 측정하고 요소를 제외한 모든 성분을 비커에서 신선한 배지와 혼합하고 오토클레이브(121°C, 15psi, 15분).
   1. 오토클레이브 후, 필요한 양의 요소(2mg)를 신선한 배지 1ml와 혼합하고 0.22μm 주사기 필터가 장착된 주사기에 통과시켜 농축 과정을 완료합니다.
   2. 준비된 배양액(세포 + 배지) 9ml가 들어 있는 멸균된 원심분리기 튜브에 첨가제가 포함된 이 농축 배지 1ml를 첨가합니다.
      메모: 요소는 고온에서 분해될 수 있으므로 오토클레이브에서 멸균할 수 없습니다. 따라서 다른 성분을 고압멸균한 후(121°C, 15psi, 15분) 0.22μm 주사기 필터를 통해 요소를 마지막으로 첨가합니다.
3. 기계식 와류기를 사용하여 각 튜브를 철저히 소용돌이치게 합니다. 농축된 액체(세포 + 배지 + 첨가제)를 30°C의 흔들리지 않는 인큐베이터에 넣습니다. 침전 시작을 위해 모든 장치를 정기적으로 모니터링하십시오. 광학 현미경을 사용하여 육안으로 강수량의 시작이 감지되면 현미경 관찰을 시작합니다. 이것은 일반적으로 실험 시작 후 30-36시간 사이입니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
파이렉스 플라스크	피셔 사이언티픽	S63268	코닝 삼각
측정 실린더	콜-파머	CP08559GC	Cole-Parmer 클래스 A 눈금 실린더(Cal Cert, TC 포함); 1000mL, 1/팩
분석 저울	오하우스	AX124E	시약의 무게를 측정하는 데 사용
오토 클레이 브	브링크만	58619000
오토클레이브 테이프	VWR	52428864
알루미늄 호일	시그마-알드리치	Z185140	플라스크를 오토클레이브에 넣기 전에 밀봉하는 데 사용됩니다.
박테리아 스톡	시달레인	11859	S. pasteurii의 -80°C 재고, ATCC 번호. Cat에 대해 언급됩니다. 아니요.
Mline 단일 채널 기계식 피펫터, 가변 용량	바이오히트	725010	VWR에서 카탈로그 번호 14005976으로 판매
마이크로피펫 팁	피셔 사이언티픽	212772B	한천 플레이트를 긁는 데 사용
부 화기	바인더	80079098	미생물학 인큐베이터, BF 시리즈
쉐이킹 인큐베이터	VWR	14004300	VWR 시그니처 벤치탑 쉐이킹 인큐베이터
파라필름	시그마-알드리치	P7793	한천 플레이트를 밀봉하는 데 사용
요소	시그마-알드리치	U1250	영양 배지를 위한 농축
중탄산나트륨	시그마-알드리치	S8875	영양 배지를 위한 농축
염화칼슘	시그마-알드리치	C1016	영양 배지를 위한 농축