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1. 기구, 배양 배지, 용액 및 페트리 접시 준비
1. 알루미늄 호일로 덮인 50mL 비커에 이쑤시개를 오토클레이브하여 멸균 상태를 유지합니다.
2. 오토클레이브에서 사용할 모든 건조 식품(팁, 스틱, 유리 제품 등)을 멸균합니다.
메모: 주의! 사용된 오토클레이브 모델에 대한 모든 안전 지침을 따르십시오. 오토클레이브는 폭발, 증기로 인한 화상, 뜨거운 표면, 재료 및 매체와의 접촉의 위험이 있습니다.
3. 배양액을 성장시키기 위해 MS 한천(만니톨 대두 가루(SFM))을 준비합니다.
1. 1L 플라스크에 콩가루 5g과 한천 5g을 넣습니다.
2. 만니톨 5g을 수돗물 250mL에 녹이고 콩가루와 한천이 들어 있는 플라스크에 분배합니다.
3. 플라스크 입구에 폼 플러그와 호일을 추가하고 121°C, 15psi에서 최소 30분 동안 오토클레이브합니다.
주의: 이 매체는 쉽게 끓습니다. 고압멸균되는 MS 한천의 실제 부피의 최소 4배를 담을 수 있는 플라스크를 사용하십시오. 유사한 안전 고려 사항으로 오토클레이브 대신 표준 압력솥을 사용할 수 있습니다. 또는 오토클레이브에 접근할 수 없는 경우 전자레인지를 사용하여 매체 및 재료를 멸균할 수 있습니다. 고등학교 교사는 또한 고압멸균 용품에 접근하기 위해 지역 대학과 협력하기를 원할 수 있습니다.
4. 다룰 수 있을 만큼 편안해질 때까지 미디어를 식힙니다. 한천은 50°C 이하의 온도에서 응고되므로 너무 오래 식히지 않도록 주의하십시오.
5. 각 페트리 접시의 바닥이 약 절반이 채워질 때까지(페트리 접시당 약 25mL의 배지) 플라스크에서 멸균 페트리 접시에 MS 한천을 붓습니다. 한천 플레이트를 사용하기 전에 응고시키십시오. 한천 접시는 필요할 때까지 실온에서 비닐 봉지에 보관하십시오.
메모: 한천 플레이트는 특히 배지에 항생제가 필요한 경우 냉장고에 보관할 수도 있습니다.
2. 번식을 위해 플레이트에 스트렙토미세스를 줄무늬로 남 깁니다.
1. 줄무늬 스트렙토미세스 는 사분면 줄무늬 방법과 같은 표준 방법을 사용하여 MS 한천 플레이트에 단일 콜로니로 균주를 공급합니다.
메모: 접종 루프 또는 멸균 이쑤시개를 사용할 수 있습니다. 선택 사항: R2YE 및 최소 배지와 같은 Streptomyces 종에는 일반적으로 다른 배지가 사용됩니다.
2. 플레이트를 30°C에서 배양합니다.
3. 4-6일마다 단일 콜로니를 선택하여 플레이트를 재생산합니다. 식민지가 나이가 들수록 무작위 돌연변이가 발생하기 쉽습니다.
3. 시각적 외관 비교 및 기록
1. 2단계에서와 같이 모든 균주를 줄무늬로 묶은 후 야생형 부모 균주와 비교하여 각 돌연변이에 대한 콜로니 형태를 기록해 둡니다. 새로운 Streptomyces 종을 특성화할 때 새로운 분리주를 S. coelicolor 또는 S. venezuelae와 같이 잘 연구된 종의 분리주와 비교하십시오. 기본 모양, 콜로니의 표면(흐릿함, 대머리, 주름 등), 불투명도, 융도 및 색소 침착(영양 균사체, 공중 균사체 및/또는 주변 매체를 구별함)과 같은 특성(그림 1)을 기록하십시오.
2. MS 한천 플레이트에 라벨을 붙이고 야생형 및 돌연변이 균주를 쐐기 패턴으로 줄무늬로 만듭니다(그림 1). 교차 오염을 방지하기 위해 균주가 다른 균주에 닿지 않도록 주의하십시오. 균주가 접시에 줄무늬가 있는 날짜와 시간을 기록해 둡니다. 플레이트를 30°C에서 배양합니다.
3. 재배된 페트리 접시를 컬러 또는 흰색 종이에 올려 배경을 균질화합니다. 종이에 균주 이름, 날짜, 배양 온도 및 첫 번째 플레이트 줄무늬 때의 시간을 적습니다. 혼란을 최소화하기 위해 종이 배경에 후자의 정보가 적힌 플레이트의 디지털 사진을 찍습니다.
메모: 그림을 준비하는 데 사용할 경우 나중에 사진에서 글을 잘라낼 수 있습니다.
