Streptomyces의 발달 돌연변이를 평가하기 위한 위상차 현미경

Abstract

출처: Bennett, JA et al. Streptomyces 발달 돌연변이체의 시각적 및 현미경적 평가. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 위상차 현미경을 사용하여 야생형과 돌연변이 Streptomyces coelicolor 사이의 표현형 차이를 조사하는 방법을 보여줍니다. 포자 형성의 발달 결함을 감지하기 위해 공중 필라멘트를 준비하고 이미징하는 것과 관련된 단계를 간략하게 설명합니다.

Protocol

1. 위상차 현미경 수행

1. 핀셋은 70% 에탄올로 세척한 다음 분젠 버너 불꽃을 통과시켜 에탄올을 증발시켜 멸균합니다. 식히십시오.
2. 커버슬립을 70% 에탄올로 세척한 다음 멸균 페트리 접시에서 건조시켜 멸균합니다.
3. 검사할 박테리아 성장의 커버슬립 리프트를 준비합니다.
   1. 멸균 핀셋으로 멸균 커버슬립을 집어 들고 Streptomyces coelicolor 박테리아 성장이 조밀한 만니톨 콩가루(MS) 한천 플레이트에 커버슬립을 놓습니다. 핀셋으로 커버슬립 뒷면을 부드럽게 눌러 박테리아 포자와 공중 균사체가 충분히 전달되도록 합니다.
4. 플레이트에서 커버슬립을 집어 들고 세포 물질이 있는 면이 현미경 슬라이드 표면을 향하도록 배치하고 장착을 위해 물에 50% 글리세롤 15μL 방울을 떨어뜨립니다. 커버슬립을 슬라이드에 대해 45° 각도로 놓고 50% 글리세롤 위에 떨어뜨려 기포를 줄입니다.
5. (선택 사항) 슬라이드 보존을 위해 투명 매니큐어로 밀봉하십시오.
6. 수명 주기 동안 다양한 시간 간격으로 위상차 현미경을 수행합니다.
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Results

그림 1: 무작위 트랜스포존 삽입 돌연변이를 포함하는 Streptomyces coelicolor 백색 돌연변이 균주에 대한 대표적인 공중 필라멘트를 보여주는 위상차 현미경 사진. (A) 도시된 것은 동시적이고 규칙적인 간격의 세포 분열을 거쳐 균일한 모양과 크기의 포자를 생성하는 대표적인 야생형 공중 필라멘트입니다(MT1110). .......

Materials