C. elegans 녹다운 스크리닝을 위한 멀티웰 액체 기반 분석

초록

출처: Anderson, Q. L. et al. 고처리량, 고함량, 액체 기반 C. elegans 병리 시스템. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 숙주-병원체 상호 작용 중 유전자 녹다운을 연구하기 위해 Caenorhabditis elegans 를 사용하는 고처리량 스크리닝 방법을 보여줍니다. 녹다운 웜을 준비하고 이를 분석 플레이트로 옮겨 병원체 유발 웜 사멸의 효과를 평가하는 절차를 간략하게 설명합니다.

프로토콜

1. 다발 Caenorhabditis elegans 균주 또는 녹다운 스크리닝을 위한 적응(리보핵산 간섭(RNAi) 스크리닝 설정)

메모: 이것은 24웰 플레이트 설정에 대해 설명된 RNAi 스크리닝입니다.

1. RNAi로 파종된 벌레가 포함된 24웰 플레이트의 웰당 1mL의 S Basal을 추가합니다. 플레이트를 흔들어 웜을 부드럽게 교반한 다음 웜을 빈 멸균 24 딥웰 플레이트로 옮깁니다. 벌레가 중력에 의해 가라앉도록 합니다(~5분).
2. 상청액을 흡인하여 약 1mL를 남깁니다. 각 웰에 7mL의 S Basal을 첨가합니다.
3. 1.1 - 1.2단계를 최소 2회 더 반복합니다. 최종 세척 후 상청액을 흡인하여 약 400μL를 남깁니다.
4. 웜 분류기의 리샘플러 기능을 사용하여 24웰 플레이트 웜 현탁액에서 22개의 웜을 384웰 플레이트의 각 웰로 분류합니다(24웰 플레이트의 각 웰은 384웰 플레이트의 8 - 12웰을 산출함).
   1. 굶주림을 방지하려면 분류하기 전에 박테리아를 384웰 플레이트(OP50과 같이 식품으로만 사용되는 균주 또는 병원성 균주)에 피펫팅하십시오.
5. 웜을 384웰 플레이트에 분류한 후 소분자 또는 기타 실험 특정 물질을 추가합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
COPAS FP 바이오소터	유니온 생체 인식		대형 유세포 분석기/웜 분류기
24 딥 웰 RB 블록	써모 피셔 사이언티픽	CS15124
384-웰 플레이트	그라이너 바이오-원	MPG-781091
선충 성장 배지(NGM)			리터당 양: 한천 18g, NaCl 3g, 펩톤 2.5g, 염화칼슘 1mL(1M), 황산마그네슘 1mL(1M), 인산염 완충액 25mL, 밀리큐수 973mL
S 기초			리터당 양: NaCl 5.85g, 인산일염기칼륨 6g, 인산이염기칼륨 1g, 밀리큐수 1리터
한천	USB생명과학	A0930
나크롬	USB생명과학	S5000 시리즈
펩톤	USB생명과학	P3300
염화칼슘	USB생명과학
황산마그네슘	피셔 사이언티픽	M63-500
인산염 완충액			리터당 양: 인산이염기칼륨(1M) 132mL 및 인산일염기칼륨(1M) 868mL
일염기성 인산칼륨	아크로스 오가닉스	7778-77-0
이염기성 인산칼륨	USB생명과학	P5100
박테리아 균주
녹농균(PA14)
대장균 슈퍼푸드 (OP50)
대장균 RNAi 발현 박테리아(HT115)
웜 균주
glp-4(bn2) (Beanan and Strome, 1992, PMID: 1289064)