1. 박테리아 생물발광 균주의 발현
메모: 박테리아 생물발광 균주는 성장 및 빛 생산을 위해 특정 성장 배지/인공 해수 배지가 필요합니다.
- 별도로 준비된 두 개의 배지 성분으로 구성된 인공 해수 배지를 준비합니다.
메모: 다음 양은 액체 배지 1L 또는 한천 배지 1L에 대한 양입니다.- 인공 해수 배지의 경우, 다음 염으로 계량합니다: NaCl (염화나트륨) 28.13 g, KCl 0.77 g (염화칼륨), CaCl2 · 2H2O 1.60 g (염화칼슘 이수화물), MgCl2 · 6H2O 4.80 g (염화마그네슘 육수화물), NaHCO3 0.11 g (중탄산나트륨) 및 3.50 g MgSO4 · 7H2O (황산마그네슘 칠수화물).
- 증류수 1L를 넣고 모든 성분을 녹입니다.
- LB(Luria-Bertani) 배지의 경우 효모 추출물 10g, 펩톤 10g, 한천 플레이트의 경우 한천 20g을 추가로 함량합니다.
- 수돗물 250mL를 넣고 성분을 녹입니다.
- 준비된 두 배지를 121°C에서 20분 동안 따로 오토클레이브합니다.
- 한천 플레이트의 경우 고압멸균 직후 LB 배지 250mL와 인공 해수 배지 750mL를 결합하고 플레이트를 준비합니다.
- 액체 배지의 경우, 250mL의 LB 배지와 750mL의 인공 해수 배지를 오토클레이브 직후 또는 냉각 시 결합합니다.
메모: 인공 해수 매체는 염분 침전을 통해 탁해질 수 있습니다.
- 박테리아 생물발광 균주를 인공 해수 배지 한천 플레이트에 줄무늬로 만들고 24 - 30 °C에서 밤새 배양합니다.
메모: 박테리아 균주의 장기 보관은 일반적으로 박테리아 배양의 글리세롤 스톡을 동결하여 달성됩니다. 해동 후 성장의 지연 단계로 인해 액체 배양에 사용하기 전에 모든 균주에 대해 균일한 시작 조건을 보장하기 위해 균주는 항상 한천 플레이트에 먼저 줄무늬를 남겨야 합니다. - 플레이트에서 단일 콜로니로 100mL의 인공 해수 배지를 접종하여 ONC(하룻밤 배양)를 준비합니다. ONC를 인큐베이터 셰이커에서 24 - 30 °C 및 120 rpm에서 밤새 배양합니다.
- 800mL의 인공 해수 배지에 8mL의 ONC를 접종합니다.
- 인큐베이터 셰이커에서 박테리아 세포를 24 - 30 °C 및 120 rpm에서 배양합니다.
메모: 생물발광 박테리아의 광도 프로파일은 온도에 따라 크게 변합니다. 각 박테리아 균주의 빛 생성의 조절 메커니즘에 따라 약 1 - 6시간 후에 빛 방출이 시작될 수 있습니다. - 박테리아 세포가 빛나기 시작할 때까지 관찰합니다(약 1 - 6시간).
메모: 발현의 목적에 따라 다음날까지 세포를 성장시킨 후 채취하거나, 세포가 빛나고 있는 한 계속 흔들릴 수 있습니다. 세포 채취 및 단백질 정제는 표준 절차에 따라 수행할 수 있습니다.