산화환원 염료 보충 반고체 배지를 사용한 박테리아 운동성 시각화

초록

출처: Chu, W. 및 Zhuang, X. 색상 반응을 기반으로 박테리아 운동성 시각화. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 운동성 균주와 비운동성 균주를 시각적으로 구별하여 박테리아 운동성을 평가하기 위한 산화환원 염료 기반 반고체 한천 분석을 보여줍니다.

프로토콜

박테리아 균주

메모: 수생 환경에서 80개의 균주를 분리하고 대장균, 녹농균, 살모넬라 종, 비브리오 종, 폐렴균 및 에어로모나스 하이드로필라를 포함한 자동 박테리아 식별 기기( 재료 표 참조)를 사용하여 식별했습니다(표 1). 황색포도상구균(재료 표 참조)은 음성 비운동성 대조군으로 사용되었습니다. 대장균, 녹농균 및 살모넬라 티피무리움(재료 표 참조)을 양성 대조군 균주로 사용했습니다.

1. 운동성 분석에 사용할 테스트 박테리아 균주를 식별합니다.
2. 음성 비운동성 대조군과 운동성 양성 대조군 균주를 포함합니다.

TTC 강화 박테리아 운동성 관찰

1. 한천 플레이트에서 테스트 박테리아의 단일 콜로니를 선택하고 접종 바늘로 구멍을 뚫어 TTC(2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드)가 있는 반고체 배지에 접종합니다.
2. 인큐베이터에서 37°C에서 24-48시간 동안 튜브를 배양하여 결과를 관찰합니다.
3. 성장 상태 관찰: 천자선만 빨간색인 경우 박테리아를 비운동성(-)으로 특성화합니다. 빨간색이 천자선을 따라 바깥쪽으로 가볍게 퍼지는 경우 박테리아를 운동성(+)으로 특성화합니다.

표 1: 박테리아 운동성 비교.

거르다		0.4% 한천을 함유한 반고체 배지		0.4% 한천 및 0.005% TTC를 함유한 반고체 배지
		24 시간	48 시간	24 시간	48 시간
녹농균 ATCC27853		+	+	+	+
대장균 ATCC25922		+	+	+	+
S. 티피무리움 ATCC14028		+	+	+	+
S. 황색 ATCC25923		-	-	-	-
대장균 (15)		12	14	13	14
살모넬라균 종 (8)		7	8	8	8
A. 하이드로필라 (20)		18	20	20	20
비브리오 종 (8)		7	8	8	8
녹농균 (24)		18	20	22	23
K. 폐렴 (5)		-5	-5	-5	-5
숫자는 양성 균주(+)와 음성 염색(-)의 수를 나타냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
박토 한천	디프코
대장균	ATCC	ATCC25922	양성 대조군
녹농균	ATCC	ATCC27853	양성 대조군
황색포도상구균	ATCC	ATCC25923	네거티브 비운동성 제어
트립토스	옥소이드
TTC(2,3,5-트리페닐-테트라졸륨 클로라이드)	시그마	298-96-4
VITEK 2 자동 미생물 식별 시스템	바이오 메리외