박테리아 포자 발아 중 피질 분해의 비색 검출

초록

출처: Francis, MB, et al. 박테리아 포자 발아 중 피질 조각 검출. J. Vis. 경험. (2016).

이 비디오는 시간 경과에 따른 환원당의 방출을 측정하여 박테리아 포자 발아 중 피질 분해를 감지하는 비색 방법을 보여줍니다. N-아세틸글루코사민 표준물질과 시점 샘플을 사용하여 이 분석은 보라색 발색 반응을 통해 당 농도를 정량화하여 피질 가수분해 정도를 나타냅니다.

프로토콜

1. 컬러 시약

1. 샘플이 얼음 위에 있는 동안 컬러 시약을 준비합니다. 0.320g의 p-디메틸아미노벤즈알데히드(DMAB; 에를리히의 시약)을 빙초산 1.9ml에 함유했습니다.
   메모: 시약은 시간, 온도 및 빛에 민감하므로 미리 만들어서는 안 됩니다.
2. DMAB가 완전히 용해된 후 100μl의 10N HCl을 첨가하고 소용돌이치다.
3. 빙초산 5ml를 넣고 소용돌이를 넣습니다.

2. 비색 반응

1. 냉각된 각 피질 샘플 100μl를 새로운 1.5ml 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
2. 새로 준비된 색소 용액 700μl를 각 샘플에 첨가합니다.
3. 즉시 샘플을 37°C 수조로 옮기고 정확히 20분 동안 배양합니다.
4. 각 샘플 200μl를 투명한 96웰 플레이트로 옮깁니다.
5. 플레이트 리더에서 585nm에서 샘플을 정량화합니다. 샘플은 노란색에서 시작해야 하며 양성 반응은 보라색으로 바뀝니다. 피질이 많을수록 보라색이 더 깊어집니다.

재료