박테리아 포자 발아 중 피질 분해의 비색 검출

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초록

이 비디오는 시간 경과에 따른 환원당의 방출을 측정하여 박테리아 포자 발아 중 피질 분해를 감지하는 비색 방법을 보여줍니다. N-아세틸글루코사민 표준물질과 시점 샘플을 사용하여 이 분석은 보라색 발색 반응을 통해 당 농도를 정량화하여 피질 가수분해 정도를 나타냅니다.

프로토콜

1. 컬러 시약

샘플이 얼음 위에 있는 동안 컬러 시약을 준비합니다. 0.320g의 p-디메틸아미노벤즈알데히드(DMAB; 에를리히의 시약)을 빙초산 1.9ml에 함유했습니다.
메모: 시약은 시간, 온도 및 빛에 민감하므로 미리 만들어서는 안 됩니다.
DMAB가 완전히 용해된 후 100μl의 10N HCl을 첨가하고 소용돌이치다.
빙초산 5ml를 넣고 소용돌이를 넣습니다.

2. 비색 반응

냉각된 각 피질 샘플 100μl를 새로운 1.5ml 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
새로 준비된 색소 용액 700μl를 각 샘플에 첨가합니다.
즉시 샘플을 37°C 수조로 옮기고 정확히 20분 동안 배양합니다.
각 샘플 200μl를 투명한 96웰 플레이트로 옮깁니다.
플레이트 리더에서 585nm에서 샘플을 정량화합니다. 샘플은 노란색에서 시작해야 하며 양성 반응은 보라색으로 바뀝니다. 피질이 많을수록 보라색이 더 깊어집니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2.0 mL 스크류 캡 튜브	미국 과학	1420-3700
P1000 에펜도르프 피펫	에펜도르프
P200 에펜도르프 피펫	에펜도르프
P20 에펜도르프 피펫	에펜도르프
100-1250uL 피펫 팁	VWR	89079-486
1-200uL 피펫 팁	VWR	89079-458
N-아세틸-D-글루코사민	시그마	A3286-25G
무수아세트산	알파 이사르	L04295
중탄산나트륨	BDH	BDH0280-500G
사붕산칼륨 사수화물	알파 이사르	39435
수산화나트륨	BDH	BDH8019-500G
4-(디메틸아미노)벤즈알데히드	시그마	156477-100G
스펙트럼맥스 M3	분자 장치
아세트산, 빙하	BDH	BDH3098-3.8LP
가열식 순환 수조	VWR 사이언티픽	모델 1136
마이크로테스트 96	송골매	353072
배양 튜브	VWR	89000-506	96개의 투명 조직 배양 플레이트
히트 블록
소용돌이 기계

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