단일 세포 박테리아 성장의 미세유체 패터닝 및 형광 기반 추적

Abstract

출처: Pioli, R., et al., 순차적 모세관 보조 조립을 통한 미생물 및 미립자의 패턴화. J. Vis. 경험. (2021년)

이 비디오는 무탄소 현탁액 및 제어된 흐름을 사용하여 미세유체 트랩에서 단일 형광 태그가 지정된 대장균(E. coli) 세포를 캡처한 다음 영양분을 첨가하여 미세 콜로니의 성장 및 형광 이미징을 유발하는 방법을 보여줍니다.

Protocol

1. 박테리아 패턴

1. 실험 하루 전, 대장균 (균주 MG1655 prpsM-GFP)의 집단을 성장시킵니다. 냉동 육수에서 직접 배양액을 접종하고 37°C의 셰이커 인큐베이터에서 용원성 국물(LB) 배지에서 밤새 성장시킵니다. 세포가 prpsM-GFP(녹색 형광 단백질) 플라스미드를 유지하도록 50μg/mL의 카나마이신을 첨가합니다.
2. 실험 당일 실험 몇 시간 전에 박스 인큐베이터(그림 1A)를 37°C로 설정하여 시작하기 전에 균일하고 안정적인 온도를 보장합니다. 그런 다음 현미경 스테이지(그림 1B,C)에 주사기 펌프와 가열된 유리판을 설치하고 박스 인큐베이터와 동일한 온도로 온도를 설정합니다.
   메모: 현미경(그림 1E)을 포함한 전체 시스템이 밀폐된 박스 인큐베이터는 채널이 매질로 세척될 때 전체 실험 전반에 걸쳐 균일하고 일정한 온도가 유지되도록 합니다.
3. 실험 90분 전에 미세유체 칩을 100% 에탄올(EtOH)으로 채워진 용기에 넣고 100% EtOH로 채널을 최소 10분 동안 세척합니다. 미세유체 칩을 진공 데시케이터에 넣고 최소 30분 동안 가스를 제거합니다. EtOH를 증류수로 교환하고 칩을 최소 30....

Results

그림 1: 미세유체 채널에서 순차적 모세관 보조 조립을 위한 플랫폼의 개략도. (A) 박스 인큐베이터. 박스 인큐베이터는 미세유체 채널 내부에서 균일하고 일정한 온도(여기서는 30°C)를 유지합니다. (B) 액체 현탁액이 적재된 주사기. 주사기는 주사기 펌프(표시되지 않음)에 의해 제어되며 패터닝 과정에서 액체의 움직임을 제어하는 데 사용됩니다. (C) 가열 유리판. 가열된 유리판은 미세유체 채널 아래에 배치되며 템플릿 전체에 .......

Materials