Bacillus subtilis 포자의 생산 및 에어로졸 기반 증착

초록

출처: Fuchs, FM, et al. 살아있는 세포 현미경을 사용하여 Bacillus subtilis 포자의 생존에 대한 저압 플라즈마 멸균의 해로운 영향을 조사합니다. J. Vis. 경험. (2017년)

이 비디오는 Bacillus subtilis 포자의 생산, 정제 및 에어로졸 기반 증착을 통해 균일한 단층을 생성하여 포자 발아, 생존력 또는 스트레스 반응에 대한 현미경 기반 분석과 같은 다운스트림 응용 분야를 가능하게 합니다.

프로토콜

1. Bacillus subtilis 포자 생산 및 정제

1. 포자 생산을 위해, 적절한 항생제를 보충한 각각의 B. subtilis 균주의 5 mL 하룻밤 배양액을 200 mL 이중 강도 액체 Schaeffer 포자 형성 배지(리터당 16 g 영양 국물, KCl(염화칼륨) 2 g, 0.5 g MgSO₄*7 H₂O(황산마그네슘 칠수화물), 2 mL 1 M Ca(NO₃)₂ (질산칼슘), 2 mL 0.1 M MnCl₂ *• 4 H₂O (염화망간 사수화물), 2 mL 1 mM FeSO₄ (황산제일철), 2 mL 50% (w/v) 포도당18) 37°C에서 72시간 동안 또는 배양의 > 95%가 포자가 형성될 때까지 격렬한 폭기로 배양한다. 다음 균주의 포자가 사용됩니다: B. subtilis PY79(야생형) B. subtilis PY79ΔrecA::neo(DNA 복구 단백질 RecA 결핍) B. subtilis PY79 recA-yfp::cat(황색 형광 단백질[YFP]과 융합된 RecA).
2. 50mL 튜브에서 3,000 x g에서 15분 동안 원심분리하여 포자를 수확하고 멸균 증류된....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2 물질 노즐 (모델 970-8)	슐릭	14,404	230 V, 50 Hz, D 4.484/8, 0.8 mm 보어 직경
루리아 베르타니 미디엄	시그마 알드리치	70122-100G
튜브 커넥터	Festo	해당 사항 없음	지 1/8
유리 슬라이드	VWR	48300-026
Attofluor 셀 챔버	멘젤, 피셔 참조.	3406816	d=25mm, 원형
황산마그네슘 칠수화물	시그마 알드리치	13152
질산칼슘	시그마 알드리치	202967
염화망간 사수화물	시그마 알드리치	244589
황산제일철	어플리켐	13446-34-9
포도당	머 크	215422
염화칼륨	시그마 알드리치	P9541-500G
영양 국물(NB)	머 크	105443
루리아-베르타니(LB)	머 크	110283
96-웰플레이트	써모피셔	243656