시험관 내 식물-미생물 상호 작용을 모방하기 위해 식물 뿌리 삼출물을 사용한 박테리아 처리

초록

출처: Yi, Y., et al. 식물-미생물 상호작용: 감자 뿌리 삼출물에 대한 Bacillus mycoides의 전사 반응. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 식물-미생물 상호 작용을 연구하기 위한 Bacillus mycoides 배양의 준비 및 처리를 보여줍니다. 이는 스톡 배양을 줄무늬로 만들고 액체 배지에서 배양하는 것부터 교반 하에 박테리아를 식물 뿌리 삼출물에 노출시키는 단계에 대해 간략하게 설명합니다. 이 과정은 삼출물에 의해 유도된 유전자 발현 변화의 후속 분석을 위해 박테리아 세포를 수확하고 급속 냉동하는 것으로 마무리됩니다.

프로토콜

1. 성장하는 박테리아

1. B . mycoides 균주를 -80°C 글리세롤 스톡에서 Luria-Bertani(LB) 한천 플레이트에 줄무늬로 만들고 플레이트를 30°C에서 밤새 배양합니다.

2. 플레이트에서 단일 콜로니로 LB 액체 배지에 접종하고 200rpm의 진탕 인큐베이터에서 밤새 배양액을 성장시킵니다.
30 °C.

2. 박테리아의 처리 및 샘플링

1. 뿌리 삼출물로 처리된 박테리아의 성장 곡선을 음성 대조군과 비교하려면 LB 액체 배지 50mL를 포함하는 일련의 플라스크를 준비합니다. 모든 플라스크에 하룻밤 박테리아 배양액 0.5mL를 첨가하고 각각 0%, 5%, 10% 또는 15%(v/v) 뿌리 삼출물 또는 멸균 탈이온수를 배지에 첨가합니다.

2. 뿌리 삼출물 대신 탈이온수가 포함된 배양액을 대조군으로 사용합니다. 이후 1시간마다 600nm(OD₆₀₀)에서 광학 밀도를 측정합니다. OD₆₀₀ 값 대 시간을 플로팅하여 성장 곡선을 생성합니다.

3. 300mL 플라스크에서 90mL의 예열된 LB 배지로 하룻밤 B . mycoides 배양액을 초기 OD₆₀₀ ~ 0.05로 희석합니다. 뿌리 삼출물 10mL를 배양액에 첨가하고 30°C에서 1시간 동안 배양합니다.

4. 10mL 멸균 탈이온수 처리를 대조군으로 사용합니다. 4°C에서 2분 동안 9,000 x g 에서 원심분리하여 배양액에서 세포를 수집합니다. 상청액을 버리고 즉시 펠릿을 액체 질소에 동결한 다음 사용할 때까지 -80°C에서 보관합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
차아염소산나트륨	시그마	CAS : 7681-52-9	10-15% 활성 염소
루리아-베르타니(LB) 국물
인큐베이터	뉴브런즈윅 사이언티픽	이노바 4000
분광 광도계	써모 피셔 사이언티픽	제네시스 20
액체 질소
유리구슬	시그마	지8893	0.5 μm
나사 캡이 있는 2.0ml 튜브			RNase 무함유
1.5ml 및 2.0ml 에펜도르프 튜브			RNase 무함유
원심 분리기	에펜도르프	5430