$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. 비타입불가능한 인플루엔자(NTHi)를 배양하고 접종물을 제조하는 단계
- 초콜릿 한천 플레이트에 NTHi를 플레이트하고 플레이트를 37°C 및 5% CO2에서 밤새 가습된 CO2 인큐베이터에서 거꾸로 유지합니다. 다음날, 뇌 심장 주입 국물에서 박테리아를 배양합니다. 그런 다음 멸균 1.5ml 튜브에 국물 1ml를 추가합니다.
- 실온에서 5분 동안 4,000 x g에서 원심분리합니다. 그런 다음 상청액을 버리고 펠릿을 멸균 1x 인산염 완충 식염수(PBS) 1ml에 재현탁합니다. 이 단계를 한 번 반복합니다.
- 재현탁 용액 100μl를 900μl의 1x PBS로 옮기고 분광 광도계에서 600nm 파장에서 희석된 배양물의 흡광도를 측정합니다.
- 초콜릿 한천 플레이트에서 1:10 연속 희석액을 배양하고 37°C 및 5%CO2에서 밤새 배양하여 접종물의 생존력 및 콜로니 형성 단위(CFU)를 결정합니다.
- 이전 단계에서 결정된 생존율 및 CFU에 기초하여 접종물을 20 x 106 CFU/ml의 최종 농도로 조정합니다.