비타형 헤모필루스 인플루엔자 배양

초록

출처: Venuprasad, K. et. al., 기도 염증을 연구하기 위한 마우스 모델에서 헤모필루스 인플루엔자의 기관내 투여. J. Vis. 경험. (2016년)

이 비디오는 유형이 불가능한 헤모필루스 인플루엔자의 배양과 다운스트림 집락화 또는 감염 연구를 위한 용량 표준화된 접종물의 준비를 보여줍니다.

프로토콜

1. 비타입불가능한 인플루엔자(NTHi)를 배양하고 접종물을 제조하는 단계

1. 초콜릿 한천 플레이트에 NTHi를 플레이트하고 플레이트를 37°C 및 5% CO₂에서 밤새 가습된 CO₂ 인큐베이터에서 거꾸로 유지합니다. 다음날, 뇌 심장 주입 국물에서 박테리아를 배양합니다. 그런 다음 멸균 1.5ml 튜브에 국물 1ml를 추가합니다.
2. 실온에서 5분 동안 4,000 x g에서 원심분리합니다. 그런 다음 상청액을 버리고 펠릿을 멸균 1x 인산염 완충 식염수(PBS) 1ml에 재현탁합니다. 이 단계를 한 번 반복합니다.
3. 재현탁 용액 100μl를 900μl의 1x PBS로 옮기고 분광 광도계에서 600nm 파장에서 희석된 배양물의 흡광도를 측정합니다.
4. 초콜릿 한천 플레이트에서 1:10 연속 희석액을 배양하고 37°C 및 5%_CO2에서 밤새 배양하여 접종물의 생존력 및 콜로니 형성 단위(CFU)를 결정합니다.
5. 이전 단계에서 결정된 생존율 및 CFU에 기초하여 접종물을 20 x 10⁶ CFU/ml의 최종 농도로 조정합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
초콜릿 한천 접시	피셔 사이언티픽	CAS50-99-7
1.5ml 미세 원심분리기 튜브	라이트 랩	A-7001-R
PBS 1개	깁코	10010-023